Pan-TEAD Antibody [L14N23]

目錄號: F0747

抗體應(yīng)用：反應(yīng)性：Human, Mouse, Rat, Monkey

Lane 1: T-47D
Lane 2: ACHN
Lane 3: COS-7
Lane 4: HepG2
Lane 5: Vero
Lane 6: 3T3
Lane 7: F9

規(guī)格	價格	庫存
20ul	790	現(xiàn)貨
50uL	1240	現(xiàn)貨
100ul	1990	現(xiàn)貨
100uL*2	3790	現(xiàn)貨
400-668-6834 [email protected]

客戶使用該產(chǎn)品的實驗數(shù)據(jù)

使用信息

稀釋比例
WB1:1000 IP1:100

抗體應(yīng)用
WB, IP

反應(yīng)性
Human, Mouse, Rat, Monkey

抗體類型
Rabbit Monoclonal Antibody

儲存液配方
PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN?

儲存條件(自收到貨起)
–20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

預(yù)測分子量
50 kDa, 53 kDa, 55 kDa, 60 kDa

陽性對照	T-47D; ACHN; COS-7; HepG2; 3T3; F9; Vero
陰性對照

實驗方法

WB
實驗步驟：樣品制備 1. 組織樣品：破碎組織，加入適量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制劑Cocktail），低溫勻漿或置于冰上超聲裂解樣品，靜置30 min。 2. 貼壁細(xì)胞樣品：吸去培養(yǎng)基, 將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至EP管中。用冰冷的 PBS 清洗細(xì)胞 2 遍。加入適量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制劑Cocktail），超聲破碎，冰上靜置裂解 30 min。冰上靜置裂解 5 min。 3. 懸浮細(xì)胞樣品：將培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至離心管中離心，棄上清，用冰冷的 PBS 清洗細(xì)胞 2 遍。加入適量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制劑Cocktail），冰上靜置裂解 5 min。 4. 將所得勻漿液/裂解液置于離心機(jī)中 4°C 離心 15 min，收集上清液； 5. 取少量裂解液測定蛋白質(zhì)濃度； 6. 加入蛋白上樣緩沖液，將 20 µL樣品在 95~100°C加熱 5 min，冰上靜置冷卻后離心 5 min。電泳分離 1. 根據(jù)所提蛋白的濃度，將適量蛋白樣品和 Marker 上樣至 SDS-PAGE 凝膠。建議分離膠（即下層膠）濃度：10 %。 SDS-PAGE 分離膠濃度選擇參照表 2. 電源調(diào) 80 V, 30 min。然后電源調(diào) 110 V~150 V，觀察 Marker，待蛋白所在的預(yù)染蛋白 Marker 指示帶得到合適的分離后，即可停止電泳。（注意電泳時電流切勿過大，如超過 150 mA 會導(dǎo)致溫度上升，容易影響跑膠結(jié)果。如無法避免采用大電流，可對電泳槽使用冰浴降溫。）轉(zhuǎn)膜 1.拿出電轉(zhuǎn)槽，把夾子和耗材浸泡在預(yù)冷電轉(zhuǎn)液中； 2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用轉(zhuǎn)移緩沖液沖洗； 3.按照“夾子黑邊-海綿-濾紙-濾紙-膠-PVDF膜-濾紙-濾紙-海綿-夾子白邊”的順序安裝好； 4.將蛋白電轉(zhuǎn)移至 PVDF膜上。（推薦采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔徑規(guī)格選擇參照表濕轉(zhuǎn)法參考條件：200 mA, 120 min。（注意電轉(zhuǎn)條件可根據(jù)蛋白大小適當(dāng)調(diào)節(jié)，分子量大的蛋白適宜采用大電流，并延長轉(zhuǎn)膜時間，但需要確保電轉(zhuǎn)槽始終處于低溫的環(huán)境中，避免凝膠融化。）封閉 1. 電轉(zhuǎn)移后，室溫下用 TBST 洗膜 5 min； 2. 在封閉液中將膜孵育 1 h，室溫； 3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。抗體孵育 1. 用一抗稀釋液配制一抗工作液（建議一抗稀釋比 1:1000），4°C 條件下與膜輕柔搖晃孵育過夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min； 3. 在封閉液中加入二抗，室溫條件下與膜輕柔搖晃孵育 1 h； 4. 孵育結(jié)束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。顯色 1. 加入配制好的 ECL 發(fā)光底物（或根據(jù)二抗選擇其他顯色基質(zhì)）混合均勻； 2. 與膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜濕潤），置于顯影儀中進(jìn)行曝光。

實驗步驟：

樣品制備

1. 組織樣品：破碎組織，加入適量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制劑Cocktail），低溫勻漿或置于冰上超聲裂解樣品，靜置30 min。

2. 貼壁細(xì)胞樣品：吸去培養(yǎng)基, 將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至EP管中。用冰冷的 PBS 清洗細(xì)胞 2 遍。加入適量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制劑Cocktail），超聲破碎，冰上靜置裂解 30 min。冰上靜置裂解 5 min。

3. 懸浮細(xì)胞樣品：將培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至離心管中離心，棄上清，用冰冷的 PBS 清洗細(xì)胞 2 遍。加入適量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制劑Cocktail），冰上靜置裂解 5 min。

4. 將所得勻漿液/裂解液置于離心機(jī)中 4°C 離心 15 min，收集上清液；

5. 取少量裂解液測定蛋白質(zhì)濃度；

6. 加入蛋白上樣緩沖液，將 20 µL樣品在 95~100°C加熱 5 min，冰上靜置冷卻后離心 5 min。

電泳分離

1. 根據(jù)所提蛋白的濃度，將適量蛋白樣品和 Marker 上樣至 SDS-PAGE 凝膠。建議分離膠（即下層膠）濃度：10 %。 SDS-PAGE 分離膠濃度選擇參照表

2. 電源調(diào) 80 V, 30 min。然后電源調(diào) 110 V~150 V，觀察 Marker，待蛋白所在的預(yù)染蛋白 Marker 指示帶得到合適的分離后，即可停止電泳。（注意電泳時電流切勿過大，如超過 150 mA 會導(dǎo)致溫度上升，容易影響跑膠結(jié)果。如無法避免采用大電流，可對電泳槽使用冰浴降溫。）

轉(zhuǎn)膜

1.拿出電轉(zhuǎn)槽，把夾子和耗材浸泡在預(yù)冷電轉(zhuǎn)液中；

2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用轉(zhuǎn)移緩沖液沖洗；

3.按照“夾子黑邊-海綿-濾紙-濾紙-膠-PVDF膜-濾紙-濾紙-海綿-夾子白邊”的順序安裝好；

4.將蛋白電轉(zhuǎn)移至 PVDF膜上。（推薦采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔徑規(guī)格選擇參照表

濕轉(zhuǎn)法參考條件：200 mA, 120 min。

（注意電轉(zhuǎn)條件可根據(jù)蛋白大小適當(dāng)調(diào)節(jié)，分子量大的蛋白適宜采用大電流，并延長轉(zhuǎn)膜時間，但需要確保電轉(zhuǎn)槽始終處于低溫的環(huán)境中，避免凝膠融化。）

封閉

1. 電轉(zhuǎn)移后，室溫下用 TBST 洗膜 5 min；

2. 在封閉液中將膜孵育 1 h，室溫；

3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

抗體孵育

1. 用一抗稀釋液配制一抗工作液（建議一抗稀釋比 1:1000），4°C 條件下與膜輕柔搖晃孵育過夜；

2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；

3. 在封閉液中加入二抗，室溫條件下與膜輕柔搖晃孵育 1 h；

4. 孵育結(jié)束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

顯色

1. 加入配制好的 ECL 發(fā)光底物（或根據(jù)二抗選擇其他顯色基質(zhì)）混合均勻；

2. 與膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜濕潤），置于顯影儀中進(jìn)行曝光。

Datasheet & SDS

生物描述

特異性
Pan-TEAD Antibody [L14N23] 可識別總 TEAD 蛋白的內(nèi)源水平。該抗體已被證明可以識別轉(zhuǎn)染細(xì)胞提取物中的 TEAD 1、2、3 和 4。

蛋白定位
細(xì)胞核

Uniprot ID
Q15562, P28347, Q15561, Q99594

克隆號
L14N23

別名
TEAD-2, TEF-4, TEF-3, TEF-5, TEF-1

背景
轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)關(guān)聯(lián)域 (TEAD) 轉(zhuǎn)錄因子在發(fā)育、細(xì)胞增殖、組織再生和維持組織平衡等各種生物過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。它們充當(dāng)中央樞紐，整合和協(xié)調(diào)來自多種途徑（例如 Hippo、Wnt、TGFβ 和 EGFR）的信號。 TEAD 的失調(diào)會影響一些眾所周知的癌癥相關(guān)基因，如 KRAS、BRAF、LKB1、NF2 和 MYC，從而影響腫瘤進(jìn)展、轉(zhuǎn)移、代謝、免疫反應(yīng)和耐藥性。 TEAD家族包含四種進(jìn)化上保守的轉(zhuǎn)錄因子，即TEAD1 (TEF-1/NTEF)、TEAD2 (TEF-4/ETF)、TEAD3 (TEF-5/ETFR-1)和TEAD4 (TEF-3/ETFR-2) /FR-19），廣泛表達(dá)于各種人體組織中。 TEAD 家族的每個成員在胚胎發(fā)育過程中都表現(xiàn)出組織特異性功能，有助于心臟發(fā)生、神經(jīng)發(fā)育和滋養(yǎng)外胚層譜系的確定等過程。此外，TEAD 因子對于調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖和執(zhí)行細(xì)胞生物學(xué)中的接觸抑制至關(guān)重要。

背景

轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)關(guān)聯(lián)域 (TEAD) 轉(zhuǎn)錄因子在發(fā)育、細(xì)胞增殖、組織再生和維持組織平衡等各種生物過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。它們充當(dāng)中央樞紐，整合和協(xié)調(diào)來自多種途徑（例如 Hippo、Wnt、TGFβ 和 EGFR）的信號。 TEAD 的失調(diào)會影響一些眾所周知的癌癥相關(guān)基因，如 KRAS、BRAF、LKB1、NF2 和 MYC，從而影響腫瘤進(jìn)展、轉(zhuǎn)移、代謝、免疫反應(yīng)和耐藥性。 TEAD家族包含四種進(jìn)化上保守的轉(zhuǎn)錄因子，即TEAD1 (TEF-1/NTEF)、TEAD2 (TEF-4/ETF)、TEAD3 (TEF-5/ETFR-1)和TEAD4 (TEF-3/ETFR-2) /FR-19），廣泛表達(dá)于各種人體組織中。 TEAD 家族的每個成員在胚胎發(fā)育過程中都表現(xiàn)出組織特異性功能，有助于心臟發(fā)生、神經(jīng)發(fā)育和滋養(yǎng)外胚層譜系的確定等過程。此外，TEAD 因子對于調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖和執(zhí)行細(xì)胞生物學(xué)中的接觸抑制至關(guān)重要。

參考文獻(xiàn)
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/31212916/

PVDF膜孔徑規(guī)格選擇參照表

Protein Size (kDa)	PVDF Transfer Membrane Pore Size (μm)
< 10	0.22
10-20	0.22
20-30	0.45
30-45	0.45
45-70	0.45
80-100	0.45
100-140	0.45
> 140	0.45

技術(shù)支持

在訂購、運(yùn)輸、儲存和使用我們的產(chǎn)品的任何階段，您遇到的任何問題，均可以通過撥打我們的熱線電話400-668-6834，或者技術(shù)支持郵箱[email protected]，直接聯(lián)系到我們。我們會在24小時內(nèi)盡快聯(lián)系您。

* 必填項

Protein Size (kDa)	Separating Gel Percentage
4-40	20%
12-45	15%
10-70	12.5%
15-100	10%
25-100	8%
60-210	5%