Poly DYKDDDDK Tag多肽

Poly DYKDDDDK Tag多肽(3X DYKDDDDK Tag多肽)是一種由23個氨基酸組成，分子量為2864 Da的多肽，能夠通過競爭性結(jié)合Anti-DYKDDDDK Tag抗體，從而在免疫沉淀時洗脫與Anti-DYKDDDDK Tag抗體結(jié)合的DYKDDDDK Tag融合表達蛋白。多肽中Asp-Tyr-Lys-Xaa-Xaa-Asp這一基序重復(fù)三次，在碳端的8個氨基酸組成了經(jīng)典的DYKDDDDK Tag (Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys)。

產(chǎn)品性質(zhì)

應(yīng)用

主要用于結(jié)合到溶液中Anti-DYKDDDDK Tag單克隆抗體上的或者結(jié)合到Anti-DYKDDDDK Tag親和凝膠上的DYKDDDDK Tag融合蛋白競爭性的洗脫下來。

注意事項

1. 使用前認真閱讀使用說明；

2. 在使用及儲存親和凝膠時避免凍融，干燥或者高速離心；

3. 該產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究，不能用于藥物及其他用途。

操作流程

適用于從Anti-DYKDDDDK Tag親和凝膠上進行DYKDDDDK Tag融合蛋白的洗脫。

1. 將DYKDDDDK Tag親和凝膠徹底重懸，并迅速轉(zhuǎn)移10 μL（大約包含了5 μL的凝膠珠）的凝膠重懸液到新的EP管中；

2. 加入0.6 mL的TBS緩沖液，使用移液槍混勻。5000 rpm離心30s，去除上清。重復(fù)3-4次，確保去除所有的洗滌液；

3. 加入500 μL的細胞裂解液到洗滌過的凝膠中；

4. 在要4°C搖床上孵育2h進行結(jié)合；

5. 5000 rpm離心30s，上清液轉(zhuǎn)移到新的離心管中保存以后檢測。

6. 上步中得到的沉淀用 0.5 ml TBS緩沖液洗3-4次，至上清液中 OD280 小于 0.05 為止。

7. 通過競爭性Poly DYKDDDDK Tag多肽將DYKDDDDK Tag融合蛋白進行洗脫。

8. Anti-DYKDDDDK Tag親和凝膠回收。
Poly DYKDDDDK Tag多肽可能難以將所有的DYKDDDDK Tag融合蛋白全部洗脫下來，建議通過使用5 mL的0.1 M glycine HCl（pH 3.5）緩沖液洗滌三次，將Anti-DYKDDDDK Tag親和凝膠進行回收。回收后的Anti-DYKDDDDK Tag親和凝膠立即使用TBS緩沖液進行平衡直到流出液pH值呈中性。
注意：不要讓Anti-DYKDDDDK Tag親和凝膠留在glycine HCl緩沖液中超過20min。

9. 保存Anti-DYKDDDDK Tag親和凝膠。
使用5 mL緩沖液1（50% glycerol，10mM sodium phosphate，150 mM sodium chloride，0.02% (w/v) 疊氮化鈉，pH 7.4）洗滌Anti-DYKDDDDK Tag親和凝膠三次，然后加入5 mL緩沖液2 （50% glycerol，10 mM sodium phosphate，150 mM sodium chloride，0.02% (w/v) 疊氮化鈉，pH 7.4）并儲存于-20°C避免干掉。