小鼠CD3⁺ T細胞分選試劑盒

簡單、快速：15分鐘內(nèi)即可分選完成

無需分離柱：磁性分離器即可實現(xiàn)分離

純度高：細胞純度95%以上

活性高：細胞功能良好，無抗體和磁珠標記

質(zhì)控嚴格：粒徑控制，表面修飾控制

2-8°C下穩(wěn)定保存，有效期2年，不可冷凍。

以分選小鼠脾臟CD3⁺ T 細胞為例

1. 制備單細胞懸液：在70 μm細胞篩網(wǎng)上研磨脾臟，以預冷的PBS沖洗細胞篩網(wǎng)，收集細胞懸液于50 ml離心管中，500 g，離心5 min。
2. 離心完成后，棄上清，加入5 ml ACK紅細胞裂解液，室溫裂解5 min，再加入20 ml PBS，500 g，離心5 min。
注意：紅細胞裂解步驟可根據(jù)所用裂解液不同調(diào)整用量及時間。少量紅細胞殘留不會影響后續(xù)分選及細胞純度。
3. 離心完成后，棄上清，將脾細胞重懸于PBS，細胞懸液用70 μm細胞篩網(wǎng)過濾后，計數(shù)。計數(shù)完成后，繼續(xù)以500 g，離心5 min。
4. 離心完成后，棄上清，將細胞重懸于分選buffer中，調(diào)整細胞密度為1×10⁸ cells/ml。
注意：分選buffer為含有2 mM EDTA和2%胎牛血清（FBS）的 PBS 或者含有2mM EDTA 和0.5% BSA 的PBS，需預先通過0.22 μm濾膜過濾除菌。
5. 將100 μl細胞懸液（1×10⁷ 個細胞）加入無菌流式管底部，再加入2 μl Biotin-Ab Mix，混勻后4℃孵育10 min。
注意：加入細胞懸液時將細胞加入流式管底部，避免沿流式管管壁加入。根據(jù)所使用磁力架特點也可使用離心管進行細胞分選。如果分選更多細胞，則按比例增加Biotin-Ab Mix用量。
6. 孵育完成后，在流式管中加入20 μl Streptavidin beads（使用前渦旋振蕩重懸磁珠），混勻后4℃孵育10 min。孵育過程中應輕輕敲打管壁1~2次，防止細胞和beads沉降。
注意：如果分選更多細胞，則按比例增加Streptavidin beads用量。例如分選5×10⁷細胞，則應在500 μl細胞懸液中加入10 μl Biotin-Ab Mix和100 μl Streptavidin。如果分選少于1×10⁷ 個細胞，則將細胞懸液體積補至100 μl，使用2 μl Biotin-Ab Mix和20 μl Streptavidin。
7. 孵育完成后，在流式管加入2.5 ml分選buffer，以移液器上下混合吹打5次混勻（避免劇烈振蕩或者上下顛倒混勻）。
8. 將含有細胞的分選流式管置于磁力架上（若沒有合適的磁力架，可將流式管中液體轉(zhuǎn)移到15 mL離心管中再置于磁力架上），靜置5 min。
9. 將細胞懸液倒入無菌離心管中（傾倒過程中流式管不要脫離磁力架）或用吸管吸入離心管中（勿將液體吸盡，防止吸到磁珠），500 g，離心5 min。細胞懸液中即包含純化的小鼠CD3⁺ T細胞，離心后棄上清，收集細胞。
10. 根據(jù)實驗需要洗滌細胞后，將細胞重懸于所需緩沖液或培養(yǎng)基中，即可用于后續(xù)分子生物學或細胞生物學實驗。

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