PGC1α/β Antibody [H5N22]

目錄號: F4416

抗體應(yīng)用：反應(yīng)性：Mouse,Rat

Lane 1: Mouse liver, Lane 2: Rat heart

規(guī)格	價格	庫存
20uL	790	現(xiàn)貨
50uL	1240	現(xiàn)貨
100uL	1990	現(xiàn)貨
100uL*2	3790	現(xiàn)貨
400-668-6834 [email protected]

操作要點(diǎn)

WB
建議 SDS-PAGE 分離膠濃度：5%。

使用信息

稀釋比例
WB1:1000 - 1:6000

抗體應(yīng)用
WB, ELISA

反應(yīng)性
Mouse,Rat

抗體類型
Rabbit Monoclonal Antibody

儲存液配方
PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

儲存條件(自收到貨起)
-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

預(yù)測分子量實(shí)際分子量
113 kDa 113 kDa
^*為什么預(yù)測分子量和實(shí)際分子量會有不同？以下原因可能會導(dǎo)致蛋白分子量與預(yù)測不同：翻譯后修飾（磷酸化/糖基化）；剪接變體和異構(gòu)體；相對電荷；多聚體。

陽性對照	Mouse liver; Rat heart
陰性對照

實(shí)驗(yàn)方法

WB
實(shí)驗(yàn)步驟：樣品制備 1. 組織樣品：破碎組織，加入適量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制劑Cocktail），低溫勻漿。 2. 貼壁細(xì)胞樣品：吸去培養(yǎng)基, 用冰冷的 PBS 清洗細(xì)胞 2 遍。加入適量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制劑Cocktail），冰上靜置裂解 5 min。 3. 懸浮細(xì)胞樣品：將培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至離心管中離心，棄上清，用冰冷的 PBS 清洗細(xì)胞 2 遍。加入適量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制劑Cocktail），冰上靜置裂解 5 min。 4. 將所得勻漿液/裂解液置于離心機(jī)中 4°C 離心 15 min，收集上清液； 5. 取少量裂解液測定蛋白質(zhì)濃度； 6. 加入蛋白上樣緩沖液，將 20 µL樣品在 95~100°C加熱 5 min，冰上靜置冷卻后離心 5 min。電泳分離 1. 根據(jù)所提蛋白的濃度，將適量蛋白樣品和 Marker 上樣至 SDS-PAGE 凝膠。建議分離膠（即下層膠）濃度：5 %。 SDS-PAGE 分離膠濃度選擇參照表 2. 電源調(diào) 80 V, 30 min。然后電源調(diào) 110 V~150 V，觀察 Marker，待蛋白所在的預(yù)染蛋白 Marker 指示帶得到合適的分離后，即可停止電泳。（注意電泳時電流切勿過大，如超過 150 mA 會導(dǎo)致溫度上升，容易影響跑膠結(jié)果。如無法避免采用大電流，可對電泳槽使用冰浴降溫。）轉(zhuǎn)膜 1.拿出電轉(zhuǎn)槽，把夾子和耗材浸泡在預(yù)冷電轉(zhuǎn)液中； 2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用轉(zhuǎn)移緩沖液沖洗； 3.按照“夾子黑邊-海綿-濾紙-濾紙-膠-PVDF膜-濾紙-濾紙-海綿-夾子白邊”的順序安裝好； 4.將蛋白電轉(zhuǎn)移至 PVDF膜上。（推薦采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔徑規(guī)格選擇參照表濕轉(zhuǎn)法參考條件：200 mA, 120 min。（注意電轉(zhuǎn)條件可根據(jù)蛋白大小適當(dāng)調(diào)節(jié)，分子量大的蛋白適宜采用大電流，并延長轉(zhuǎn)膜時間，但需要確保電轉(zhuǎn)槽始終處于低溫的環(huán)境中，避免凝膠融化。）封閉 1. 電轉(zhuǎn)移后，室溫下用 TBST 洗膜 5 min； 2. 在封閉液中將膜孵育 1 h，室溫； 3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。抗體孵育 1. 用一抗稀釋液配制一抗工作液（建議一抗稀釋比 1:1000），4°C 條件下與膜輕柔搖晃孵育過夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min； 3. 在封閉液中加入二抗，室溫條件下與膜輕柔搖晃孵育 1 h； 4. 孵育結(jié)束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。顯色 1. 加入配制好的 ECL 發(fā)光底物（或根據(jù)二抗選擇其他顯色基質(zhì)）混合均勻； 2. 與膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜濕潤），置于顯影儀中進(jìn)行曝光。

實(shí)驗(yàn)步驟：

樣品制備

1. 組織樣品：破碎組織，加入適量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制劑Cocktail），低溫勻漿。

2. 貼壁細(xì)胞樣品：吸去培養(yǎng)基, 用冰冷的 PBS 清洗細(xì)胞 2 遍。加入適量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制劑Cocktail），冰上靜置裂解 5 min。

3. 懸浮細(xì)胞樣品：將培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至離心管中離心，棄上清，用冰冷的 PBS 清洗細(xì)胞 2 遍。加入適量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制劑Cocktail），冰上靜置裂解 5 min。

4. 將所得勻漿液/裂解液置于離心機(jī)中 4°C 離心 15 min，收集上清液；

5. 取少量裂解液測定蛋白質(zhì)濃度；

6. 加入蛋白上樣緩沖液，將 20 µL樣品在 95~100°C加熱 5 min，冰上靜置冷卻后離心 5 min。

電泳分離

1. 根據(jù)所提蛋白的濃度，將適量蛋白樣品和 Marker 上樣至 SDS-PAGE 凝膠。建議分離膠（即下層膠）濃度：5 %。 SDS-PAGE 分離膠濃度選擇參照表

2. 電源調(diào) 80 V, 30 min。然后電源調(diào) 110 V~150 V，觀察 Marker，待蛋白所在的預(yù)染蛋白 Marker 指示帶得到合適的分離后，即可停止電泳。（注意電泳時電流切勿過大，如超過 150 mA 會導(dǎo)致溫度上升，容易影響跑膠結(jié)果。如無法避免采用大電流，可對電泳槽使用冰浴降溫。）

轉(zhuǎn)膜

1.拿出電轉(zhuǎn)槽，把夾子和耗材浸泡在預(yù)冷電轉(zhuǎn)液中；

2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用轉(zhuǎn)移緩沖液沖洗；

3.按照“夾子黑邊-海綿-濾紙-濾紙-膠-PVDF膜-濾紙-濾紙-海綿-夾子白邊”的順序安裝好；

4.將蛋白電轉(zhuǎn)移至 PVDF膜上。（推薦采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔徑規(guī)格選擇參照表

濕轉(zhuǎn)法參考條件：200 mA, 120 min。

（注意電轉(zhuǎn)條件可根據(jù)蛋白大小適當(dāng)調(diào)節(jié)，分子量大的蛋白適宜采用大電流，并延長轉(zhuǎn)膜時間，但需要確保電轉(zhuǎn)槽始終處于低溫的環(huán)境中，避免凝膠融化。）

封閉

1. 電轉(zhuǎn)移后，室溫下用 TBST 洗膜 5 min；

2. 在封閉液中將膜孵育 1 h，室溫；

3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

抗體孵育

1. 用一抗稀釋液配制一抗工作液（建議一抗稀釋比 1:1000），4°C 條件下與膜輕柔搖晃孵育過夜；

2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；

3. 在封閉液中加入二抗，室溫條件下與膜輕柔搖晃孵育 1 h；

4. 孵育結(jié)束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

顯色

1. 加入配制好的 ECL 發(fā)光底物（或根據(jù)二抗選擇其他顯色基質(zhì)）混合均勻；

2. 與膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜濕潤），置于顯影儀中進(jìn)行曝光。

Datasheet & SDS

生物描述

特異性
PGC1α/β Antibody [H5N22] 可檢測內(nèi)源性 PGC1α/β 總蛋白水平。

蛋白定位
細(xì)胞質(zhì)，細(xì)胞核

Uniprot ID
O70343, Q8VHJ7

克隆號
H5N22

別名
LEM6; PGC-1(alpha); PGC-1alpha; PGC-1v; PGC1; PGC1A; PPARGC1; ERRL1; PERC; PGC-1(beta); PGC1B; PGC1α/β

背景
過氧化物酶體增殖物激活受體γ共激活因子1α和β (PGC1α/β) 是PGC-1家族的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄共激活因子，在細(xì)胞能量代謝和線粒體生物合成中發(fā)揮著核心調(diào)控作用。PGC1α包含一個富含亮氨酸的N端激活結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域含有LXXLL基序，對與核受體（如PPARγ）的相互作用至關(guān)重要；此外，PGC1α還包含一個C端RNA識別基序 (RRM)，該基序可結(jié)合RNA和單鏈DNA，從而促進(jìn)轉(zhuǎn)錄調(diào)控。PGC1β與PGC1α具有高度同源性，包括上述功能結(jié)構(gòu)域。PGC1α/β可共激活核受體和轉(zhuǎn)錄因子，例如NRF1、ERRα、MEF-2C和FoxO1，從而促進(jìn)線粒體復(fù)制、氧化磷酸化和脂肪酸氧化，以滿足細(xì)胞不同的能量需求。 PGC1α 調(diào)控糖異生、線粒體動力學(xué)和抗氧化防御，有助于細(xì)胞抵抗氧化應(yīng)激并維持代謝靈活性。PGC1α/β 的活性受復(fù)雜的翻譯后修飾以及與共調(diào)節(jié)因子（例如 HCF）的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用調(diào)控，這些共調(diào)節(jié)因子能夠根據(jù)環(huán)境和細(xì)胞信號動態(tài)地微調(diào)其轉(zhuǎn)錄輸出。PGC1α/β 的失調(diào)與代謝紊亂、神經(jīng)退行性疾病和癌癥密切相關(guān)。

背景

過氧化物酶體增殖物激活受體γ共激活因子1α和β (PGC1α/β) 是PGC-1家族的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄共激活因子，在細(xì)胞能量代謝和線粒體生物合成中發(fā)揮著核心調(diào)控作用。PGC1α包含一個富含亮氨酸的N端激活結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域含有LXXLL基序，對與核受體（如PPARγ）的相互作用至關(guān)重要；此外，PGC1α還包含一個C端RNA識別基序 (RRM)，該基序可結(jié)合RNA和單鏈DNA，從而促進(jìn)轉(zhuǎn)錄調(diào)控。PGC1β與PGC1α具有高度同源性，包括上述功能結(jié)構(gòu)域。PGC1α/β可共激活核受體和轉(zhuǎn)錄因子，例如NRF1、ERRα、MEF-2C和FoxO1，從而促進(jìn)線粒體復(fù)制、氧化磷酸化和脂肪酸氧化，以滿足細(xì)胞不同的能量需求。 PGC1α 調(diào)控糖異生、線粒體動力學(xué)和抗氧化防御，有助于細(xì)胞抵抗氧化應(yīng)激并維持代謝靈活性。PGC1α/β 的活性受復(fù)雜的翻譯后修飾以及與共調(diào)節(jié)因子（例如 HCF）的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用調(diào)控，這些共調(diào)節(jié)因子能夠根據(jù)環(huán)境和細(xì)胞信號動態(tài)地微調(diào)其轉(zhuǎn)錄輸出。PGC1α/β 的失調(diào)與代謝紊亂、神經(jīng)退行性疾病和癌癥密切相關(guān)。

參考文獻(xiàn)
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/40012862/ https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/38424050/

PVDF膜孔徑規(guī)格選擇參照表

Protein Size (kDa)	PVDF Transfer Membrane Pore Size (μm)
< 10	0.22
10-20	0.22
20-30	0.45
30-45	0.45
45-70	0.45
80-100	0.45
100-140	0.45
> 140	0.45

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* 必填項(xiàng)

Protein Size (kDa)	Separating Gel Percentage
4-40	20%
12-45	15%
10-70	12.5%
15-100	10%
25-100	8%
60-210	5%