SFRP4 Antibody [K23D16]

目錄號: F2563

抗體應(yīng)用：反應(yīng)性：Human, Mouse

Immunohistochemical analysis of formalin fixed paraffin embedded mouse intestine tissue with F2563 at 1:50 dilution.,
Immunofluorescent analysis of Raw264.7 cells using F2563 (green, 1:200), Hoechst (blue) and tubulin (Red).

規(guī)格	價格	庫存
20uL	790	現(xiàn)貨
50uL	1240	現(xiàn)貨
100uL	1990	現(xiàn)貨
100uL*2	3790	現(xiàn)貨
400-668-6834 [email protected]

使用信息

稀釋比例
IHC1:50 IF1:200 FCM1:50

抗體應(yīng)用
IHC, IF, FCM

反應(yīng)性
Human, Mouse

抗體類型
Rabbit Monoclonal Antibody

儲存液配方
PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN?

儲存條件(自收到貨起)
-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

陽性對照	Human ovarian carcinoma; Human ovary cancer; Human uterus cancer; Human colon; Mouse ovary; RAW 264.7; A549; THP-1; MCF7; bEnd.3; HC11; 293T
陰性對照	T-47D

實驗方法

IHC
實驗步驟：脫蠟/補液 1. 脫蠟/水合切片： 2. 將切片在二甲苯中孵育 3 次，每次 5 分鐘。 3. 將切片在 100% 乙醇中孵育兩次，每次 10 分鐘。 4. 將切片在 95% 乙醇洗滌液中孵育兩次，每次 10 分鐘。 5. 用 dH2O 清洗切片兩次，每次 5 分鐘。 6.抗原修復(fù)：對于檸檬酸鹽：將載玻片浸入 1X 檸檬酸鹽暴露溶液中，在微波爐中加熱，直至開始沸騰；在亞沸溫度 (95°-98°C) 下繼續(xù)煮 10 分鐘。在工作臺上冷卻玻片 30 分鐘。染色 1. 用 dH2O 清洗切片 3 次，每次 5 分鐘。 2. 將切片在 3% 過氧化氫中孵育 10 分鐘。 3. 用 dH2O 清洗切片兩次，每次 5 分鐘。 4. 在洗滌緩沖液中洗滌切片 5 分鐘。 5. 用 100–400 µl 封閉液在室溫下封閉每個切片 1 小時。 6. 除去封閉液，并向每個切片中添加 100–400 µl 一抗稀釋液。 4°C 孵育過夜。 7. 去除抗體溶液，用洗滌緩沖液洗滌切片 3 次，每次 5 分鐘。 8. 用 1-3 滴所需的 HRPA 覆蓋切片。在加濕室中室溫孵育 30 分鐘。 9. 用洗滌緩沖液洗滌切片 3 次，每次 5 分鐘。 10. 使用前將 DAB 顯色劑濃縮液加入 DAB 稀釋液中并充分混合。 11. 在每個切片上涂抹 100–400 µl DAB 并密切監(jiān)測。 1-10 分鐘通常可提供可接受的染色強度。 12. 將載玻片浸入 dH2O 中。 13. 如果需要，用蘇木精復(fù)染切片。 14. 用 dH2O 清洗切片兩次，每次 5 分鐘。 15. 切片脫水：95%乙醇孵育切片兩次，每次 10 秒；在 100% 乙醇中重復(fù)，孵育切片兩次，每次 10 秒；在二甲苯中重復(fù)，孵育切片兩次，每次 10 秒。 16. 用蓋玻片和封固劑封固切片。

IHC

實驗步驟：

脫蠟/補液

1. 脫蠟/水合切片：

2. 將切片在二甲苯中孵育 3 次，每次 5 分鐘。

3. 將切片在 100% 乙醇中孵育兩次，每次 10 分鐘。

4. 將切片在 95% 乙醇洗滌液中孵育兩次，每次 10 分鐘。

5. 用 dH2O 清洗切片兩次，每次 5 分鐘。

6.抗原修復(fù)：對于檸檬酸鹽：將載玻片浸入 1X 檸檬酸鹽暴露溶液中，在微波爐中加熱，直至開始沸騰；在亞沸溫度 (95°-98°C) 下繼續(xù)煮 10 分鐘。在工作臺上冷卻玻片 30 分鐘。

染色

1. 用 dH2O 清洗切片 3 次，每次 5 分鐘。

2. 將切片在 3% 過氧化氫中孵育 10 分鐘。

3. 用 dH2O 清洗切片兩次，每次 5 分鐘。

4. 在洗滌緩沖液中洗滌切片 5 分鐘。

5. 用 100–400 µl 封閉液在室溫下封閉每個切片 1 小時。

6. 除去封閉液，并向每個切片中添加 100–400 µl 一抗稀釋液。 4°C 孵育過夜。

7. 去除抗體溶液，用洗滌緩沖液洗滌切片 3 次，每次 5 分鐘。

8. 用 1-3 滴所需的 HRPA 覆蓋切片。在加濕室中室溫孵育 30 分鐘。

9. 用洗滌緩沖液洗滌切片 3 次，每次 5 分鐘。

10. 使用前將 DAB 顯色劑濃縮液加入 DAB 稀釋液中并充分混合。

11. 在每個切片上涂抹 100–400 µl DAB 并密切監(jiān)測。 1-10 分鐘通常可提供可接受的染色強度。

12. 將載玻片浸入 dH2O 中。

13. 如果需要，用蘇木精復(fù)染切片。

14. 用 dH2O 清洗切片兩次，每次 5 分鐘。

15. 切片脫水：95%乙醇孵育切片兩次，每次 10 秒；在 100% 乙醇中重復(fù)，孵育切片兩次，每次 10 秒；在二甲苯中重復(fù)，孵育切片兩次，每次 10 秒。

16. 用蓋玻片和封固劑封固切片。

IF
實驗步驟：樣品準(zhǔn)備 1. 貼壁細(xì)胞：取潔凈無菌蓋玻片置于培養(yǎng)皿中，待細(xì)胞接近長成單層后取出蓋玻片。 2. 懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞接種至多聚賴氨酸包被的潔凈無菌載玻片上。 3. 冰凍切片：將玻片置于室溫下解凍，純水或 PBS 搖洗 3次，每次 3 min。 4. 石蠟切片：先將玻片脫蠟至水，純水或 PBS 搖洗 3次，每次 3 min。然后進行抗原修復(fù)。固定 1. 使用固定液，如4%多聚甲醛（4% PFA）室溫固定細(xì)胞爬片/涂片或組織切片 10~15 min。 2. 使用 PBS 搖洗樣品 3次，每次 3 min。通透 1. 對樣品添加去垢劑，如 0.1~0.3% Triton X-100，室溫通透 10~20 min。（僅針對胞內(nèi)抗原，若是細(xì)胞膜上表達的抗原則可省略該步驟。） 2. 使用 PBS 搖洗樣品 3次，每次 3 min。封閉添加封閉液，在室溫下封閉至少 1 h。（常用的封閉液包括：與二抗同一來源的血清、BSA或山羊血清。）注意事項：從封閉開始之后的所有步驟務(wù)必保證樣品濕潤，避免干燥，否則極易產(chǎn)生高背景。免疫熒光染色（第一天） 1. 吸走封閉液，滴加稀釋后的一抗。 2. 濕盒中 4°C 孵育過夜。免疫熒光染色（第二天） 1. 吸走一抗，PBST 搖洗 3 次，每次 5 min。 2. 滴加稀釋后的熒光二抗，避光 4°C 孵育 1~2 h。 3. 吸走二抗，PBST 搖洗 3 次，每次 5 min。 4. 滴加稀釋后的 DAPI，室溫避光孵育 5~10 min。 5. PBST 中搖洗 3 次，每次 5 分鐘。封片 1. 抗熒光淬滅封片劑封片。 2. 干燥玻片，將玻片置于室溫下避光過夜。 3. 將載玻片放入玻片盒中 4°C 避光保存。

實驗步驟：

樣品準(zhǔn)備

1. 貼壁細(xì)胞：取潔凈無菌蓋玻片置于培養(yǎng)皿中，待細(xì)胞接近長成單層后取出蓋玻片。

2. 懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞接種至多聚賴氨酸包被的潔凈無菌載玻片上。

3. 冰凍切片：將玻片置于室溫下解凍，純水或 PBS 搖洗 3次，每次 3 min。

4. 石蠟切片：先將玻片脫蠟至水，純水或 PBS 搖洗 3次，每次 3 min。然后進行抗原修復(fù)。

固定

1. 使用固定液，如4%多聚甲醛（4% PFA）室溫固定細(xì)胞爬片/涂片或組織切片 10~15 min。

2. 使用 PBS 搖洗樣品 3次，每次 3 min。

通透

1. 對樣品添加去垢劑，如 0.1~0.3% Triton X-100，室溫通透 10~20 min。

（僅針對胞內(nèi)抗原，若是細(xì)胞膜上表達的抗原則可省略該步驟。）

2. 使用 PBS 搖洗樣品 3次，每次 3 min。

封閉

添加封閉液，在室溫下封閉至少 1 h。（常用的封閉液包括：與二抗同一來源的血清、BSA或山羊血清。）

注意事項：從封閉開始之后的所有步驟務(wù)必保證樣品濕潤，避免干燥，否則極易產(chǎn)生高背景。

免疫熒光染色（第一天）

1. 吸走封閉液，滴加稀釋后的一抗。

2. 濕盒中 4°C 孵育過夜。

免疫熒光染色（第二天）

1. 吸走一抗，PBST 搖洗 3 次，每次 5 min。

2. 滴加稀釋后的熒光二抗，避光 4°C 孵育 1~2 h。

3. 吸走二抗，PBST 搖洗 3 次，每次 5 min。

4. 滴加稀釋后的 DAPI，室溫避光孵育 5~10 min。

5. PBST 中搖洗 3 次，每次 5 分鐘。

封片

1. 抗熒光淬滅封片劑封片。

2. 干燥玻片，將玻片置于室溫下避光過夜。

3. 將載玻片放入玻片盒中 4°C 避光保存。

Datasheet & SDS

生物描述

特異性
SFRP4 Antibody [K23D16] 檢測內(nèi)源性 SFRP4 總的蛋白水平。

蛋白定位
細(xì)胞外環(huán)境

Uniprot ID
Q6FHJ7

克隆號
K23D16

背景
分泌型卷曲相關(guān)蛋白 4 (sFRP4) 是一種可溶性糖蛋白，在調(diào)控 Wnt 信號通路中起著關(guān)鍵作用，而 Wnt 信號通路對于細(xì)胞增殖、分化和凋亡至關(guān)重要。從結(jié)構(gòu)上看，sFRP4 由一個負(fù)責(zé)與 Wnt 蛋白結(jié)合的富含半胱氨酸的結(jié)構(gòu)域 (CRD) 和一個穩(wěn)定其結(jié)構(gòu)并增強其與 Wnt 配體結(jié)合親和力的 C 末端結(jié)構(gòu)域 (CTD) 組成。該 CRD 使 sFRP4 能夠通過阻止 Wnt 蛋白與細(xì)胞表面的卷曲受體相互作用來拮抗 Wnt 信號，從而抑制 Wnt/β-catenin 等通路的下游激活。雖然其主要作用是作為 Wnt 信號通路的拮抗因子，但 sFRP4 的功能可能取決于環(huán)境，要么抑制 Wnt 活性，要么增強 Wnt 活性。它與多種疾病有關(guān)，例如癌癥（抑制腫瘤生長）和代謝疾病（如 2 型糖尿病），其表達會破壞胰島素敏感性。它還調(diào)控細(xì)胞凋亡、組織發(fā)育和細(xì)胞穩(wěn)態(tài)。它還與代謝疾病（如 2 型糖尿病）有關(guān)，在胰島素敏感性降低方面發(fā)揮作用，以及與牛皮癬、腎纖維化和骨相關(guān)疾病等疾病有關(guān)。

背景

分泌型卷曲相關(guān)蛋白 4 (sFRP4) 是一種可溶性糖蛋白，在調(diào)控 Wnt 信號通路中起著關(guān)鍵作用，而 Wnt 信號通路對于細(xì)胞增殖、分化和凋亡至關(guān)重要。從結(jié)構(gòu)上看，sFRP4 由一個負(fù)責(zé)與 Wnt 蛋白結(jié)合的富含半胱氨酸的結(jié)構(gòu)域 (CRD) 和一個穩(wěn)定其結(jié)構(gòu)并增強其與 Wnt 配體結(jié)合親和力的 C 末端結(jié)構(gòu)域 (CTD) 組成。該 CRD 使 sFRP4 能夠通過阻止 Wnt 蛋白與細(xì)胞表面的卷曲受體相互作用來拮抗 Wnt 信號，從而抑制 Wnt/β-catenin 等通路的下游激活。雖然其主要作用是作為 Wnt 信號通路的拮抗因子，但 sFRP4 的功能可能取決于環(huán)境，要么抑制 Wnt 活性，要么增強 Wnt 活性。它與多種疾病有關(guān)，例如癌癥（抑制腫瘤生長）和代謝疾病（如 2 型糖尿病），其表達會破壞胰島素敏感性。它還調(diào)控細(xì)胞凋亡、組織發(fā)育和細(xì)胞穩(wěn)態(tài)。它還與代謝疾病（如 2 型糖尿病）有關(guān)，在胰島素敏感性降低方面發(fā)揮作用，以及與牛皮癬、腎纖維化和骨相關(guān)疾病等疾病有關(guān)。

參考文獻
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/29360572/

PVDF膜孔徑規(guī)格選擇參照表

Protein Size (kDa)	PVDF Transfer Membrane Pore Size (μm)
< 10	0.22
10-20	0.22
20-30	0.45
30-45	0.45
45-70	0.45
80-100	0.45
100-140	0.45
> 140	0.45

技術(shù)支持

在訂購、運輸、儲存和使用我們的產(chǎn)品的任何階段，您遇到的任何問題，均可以通過撥打我們的熱線電話400-668-6834，或者技術(shù)支持郵箱[email protected]，直接聯(lián)系到我們。我們會在24小時內(nèi)盡快聯(lián)系您。

* 必填項

Protein Size (kDa)	Separating Gel Percentage
4-40	20%
12-45	15%
10-70	12.5%
15-100	10%
25-100	8%
60-210	5%