STAT5 Antibody [B9G7]

目錄號(hào): F4221

抗體應(yīng)用：反應(yīng)性：Mouse, Rat, Human

Lane 1: K562, Lane 2: MOLT4, Lane 3: A20, Lane 4: Daudi

規(guī)格	價(jià)格	庫(kù)存
20uL	790	現(xiàn)貨
50uL	1240	現(xiàn)貨
100uL	1990	現(xiàn)貨
100uL*2	3790	現(xiàn)貨
400-668-6834 [email protected]

使用信息

稀釋比例
WB1:1000 IP1:100 CHIP1:50

抗體應(yīng)用
WB, IP, ChIP

反應(yīng)性
Mouse, Rat, Human

抗體類(lèi)型
Rabbit Monoclonal Antibody

儲(chǔ)存液配方
PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

儲(chǔ)存條件(自收到貨起)
-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

預(yù)測(cè)分子量
90 kDa

陽(yáng)性對(duì)照	K-562 cell; HDLM-2 cell; MOLT4 cell; Daudi cell; Maime-3M cell; A20 cell; CTLL-2 cell; YB2/0 cell
陰性對(duì)照	PC-3 cell

實(shí)驗(yàn)方法

WB
實(shí)驗(yàn)步驟：樣品制備 1. 組織樣品：破碎組織，加入適量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制劑Cocktail），低溫勻漿。 2. 貼壁細(xì)胞樣品：吸去培養(yǎng)基, 用冰冷的 PBS 清洗細(xì)胞 2 遍。加入適量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制劑Cocktail），冰上靜置裂解 5 min。 3. 懸浮細(xì)胞樣品：將培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至離心管中離心，棄上清，用冰冷的 PBS 清洗細(xì)胞 2 遍。加入適量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制劑Cocktail），冰上靜置裂解 5 min。 4. 將所得勻漿液/裂解液置于離心機(jī)中 4°C 離心 15 min，收集上清液； 5. 取少量裂解液測(cè)定蛋白質(zhì)濃度； 6. 加入蛋白上樣緩沖液，將 20 µL樣品在 95~100°C加熱 5 min，冰上靜置冷卻后離心 5 min。電泳分離 1. 根據(jù)所提蛋白的濃度，將適量蛋白樣品和 Marker 上樣至 SDS-PAGE 凝膠。建議分離膠（即下層膠）濃度：10 %。 SDS-PAGE 分離膠濃度選擇參照表 2. 電源調(diào) 80 V, 30 min。然后電源調(diào) 110 V~150 V，觀察 Marker，待蛋白所在的預(yù)染蛋白 Marker 指示帶得到合適的分離后，即可停止電泳。（注意電泳時(shí)電流切勿過(guò)大，如超過(guò) 150 mA 會(huì)導(dǎo)致溫度上升，容易影響跑膠結(jié)果。如無(wú)法避免采用大電流，可對(duì)電泳槽使用冰浴降溫。）轉(zhuǎn)膜 1.拿出電轉(zhuǎn)槽，把夾子和耗材浸泡在預(yù)冷電轉(zhuǎn)液中； 2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用轉(zhuǎn)移緩沖液沖洗； 3.按照“夾子黑邊-海綿-濾紙-濾紙-膠-PVDF膜-濾紙-濾紙-海綿-夾子白邊”的順序安裝好； 4.將蛋白電轉(zhuǎn)移至 PVDF膜上。（推薦采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔徑規(guī)格選擇參照表濕轉(zhuǎn)法參考條件：200 mA, 120 min。（注意電轉(zhuǎn)條件可根據(jù)蛋白大小適當(dāng)調(diào)節(jié)，分子量大的蛋白適宜采用大電流，并延長(zhǎng)轉(zhuǎn)膜時(shí)間，但需要確保電轉(zhuǎn)槽始終處于低溫的環(huán)境中，避免凝膠融化。）封閉 1. 電轉(zhuǎn)移后，室溫下用 TBST 洗膜 5 min； 2. 在封閉液中將膜孵育 1 h，室溫； 3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。抗體孵育 1. 用一抗稀釋液配制一抗工作液（建議一抗稀釋比 1:1000），4°C 條件下與膜輕柔搖晃孵育過(guò)夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min； 3. 在封閉液中加入二抗，室溫條件下與膜輕柔搖晃孵育 1 h； 4. 孵育結(jié)束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。顯色 1. 加入配制好的 ECL 發(fā)光底物（或根據(jù)二抗選擇其他顯色基質(zhì)）混合均勻； 2. 與膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜濕潤(rùn)），置于顯影儀中進(jìn)行曝光。

實(shí)驗(yàn)步驟：

樣品制備

1. 組織樣品：破碎組織，加入適量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制劑Cocktail），低溫勻漿。

2. 貼壁細(xì)胞樣品：吸去培養(yǎng)基, 用冰冷的 PBS 清洗細(xì)胞 2 遍。加入適量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制劑Cocktail），冰上靜置裂解 5 min。

3. 懸浮細(xì)胞樣品：將培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至離心管中離心，棄上清，用冰冷的 PBS 清洗細(xì)胞 2 遍。加入適量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制劑Cocktail），冰上靜置裂解 5 min。

4. 將所得勻漿液/裂解液置于離心機(jī)中 4°C 離心 15 min，收集上清液；

5. 取少量裂解液測(cè)定蛋白質(zhì)濃度；

6. 加入蛋白上樣緩沖液，將 20 µL樣品在 95~100°C加熱 5 min，冰上靜置冷卻后離心 5 min。

電泳分離

1. 根據(jù)所提蛋白的濃度，將適量蛋白樣品和 Marker 上樣至 SDS-PAGE 凝膠。建議分離膠（即下層膠）濃度：10 %。 SDS-PAGE 分離膠濃度選擇參照表

2. 電源調(diào) 80 V, 30 min。然后電源調(diào) 110 V~150 V，觀察 Marker，待蛋白所在的預(yù)染蛋白 Marker 指示帶得到合適的分離后，即可停止電泳。（注意電泳時(shí)電流切勿過(guò)大，如超過(guò) 150 mA 會(huì)導(dǎo)致溫度上升，容易影響跑膠結(jié)果。如無(wú)法避免采用大電流，可對(duì)電泳槽使用冰浴降溫。）

轉(zhuǎn)膜

1.拿出電轉(zhuǎn)槽，把夾子和耗材浸泡在預(yù)冷電轉(zhuǎn)液中；

2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用轉(zhuǎn)移緩沖液沖洗；

3.按照“夾子黑邊-海綿-濾紙-濾紙-膠-PVDF膜-濾紙-濾紙-海綿-夾子白邊”的順序安裝好；

4.將蛋白電轉(zhuǎn)移至 PVDF膜上。（推薦采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔徑規(guī)格選擇參照表

濕轉(zhuǎn)法參考條件：200 mA, 120 min。

（注意電轉(zhuǎn)條件可根據(jù)蛋白大小適當(dāng)調(diào)節(jié)，分子量大的蛋白適宜采用大電流，并延長(zhǎng)轉(zhuǎn)膜時(shí)間，但需要確保電轉(zhuǎn)槽始終處于低溫的環(huán)境中，避免凝膠融化。）

封閉

1. 電轉(zhuǎn)移后，室溫下用 TBST 洗膜 5 min；

2. 在封閉液中將膜孵育 1 h，室溫；

3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

抗體孵育

1. 用一抗稀釋液配制一抗工作液（建議一抗稀釋比 1:1000），4°C 條件下與膜輕柔搖晃孵育過(guò)夜；

2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；

3. 在封閉液中加入二抗，室溫條件下與膜輕柔搖晃孵育 1 h；

4. 孵育結(jié)束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

顯色

1. 加入配制好的 ECL 發(fā)光底物（或根據(jù)二抗選擇其他顯色基質(zhì)）混合均勻；

2. 與膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜濕潤(rùn)），置于顯影儀中進(jìn)行曝光。

Datasheet & SDS

生物描述

特異性
STAT5 Antibody [B9G7] 可檢測(cè)內(nèi)源性 STAT5 總蛋白水平。該抗體檢測(cè) STAT5 的 α 和 β 亞型（STAT5a 和 STAT5b）。

蛋白定位
細(xì)胞質(zhì)，細(xì)胞核

Uniprot ID
P42229 , P51692

克隆號(hào)
B9G7

別名
Signal transducer and activator of transcription 5A; STAT5A; STAT5; Signal transducer and activator of transcription 5B; STAT5B.

背景
信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子5 (STAT5) 包含兩種高度同源的異構(gòu)體 STAT5A 和 STAT5B，它們是細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子信號(hào)傳導(dǎo)的關(guān)鍵介質(zhì)。這些轉(zhuǎn)錄因子在配體與細(xì)胞因子受體結(jié)合后，由Janus激酶（JAK1、JAK2 和 JAK3）激活。多種配體（包括白細(xì)胞介素-2 (IL-2)、粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子 (GM-CSF)、生長(zhǎng)激素和催乳素）均可觸發(fā) STAT5 激活。受體刺激后，STAT5 蛋白發(fā)生酪氨酸磷酸化、二聚化（形成同源二聚體或異源二聚體），并轉(zhuǎn)位至細(xì)胞核，在那里調(diào)控靶基因的轉(zhuǎn)錄。STAT5 信號(hào)傳導(dǎo)是調(diào)控多種生物過(guò)程的基礎(chǔ)，包括細(xì)胞增殖、分化、存活以及造血和肝細(xì)胞代謝等組織特異性功能。 STAT5 的活性必須受到精確調(diào)控：過(guò)度活化會(huì)導(dǎo)致癌癥、骨髓增生性疾病、慢性炎癥和自身免疫性疾病等病理狀態(tài)，而活化不足則會(huì)導(dǎo)致貧血、血小板減少、侏儒癥、不育癥、免疫缺陷和代謝功能障礙。STAT5A 和 STAT5B 均存在多種較短的異構(gòu)體，這些異構(gòu)體通過(guò)選擇性剪接和翻譯后加工產(chǎn)生。這些蛋白質(zhì)進(jìn)一步受到磷酸化（絲氨酸、蘇氨酸或酪氨酸殘基）、泛素化和糖基化的調(diào)控，從而影響其穩(wěn)定性、二聚化能力和轉(zhuǎn)錄輸出。通過(guò)形成不同的二聚體復(fù)合物，STAT5 協(xié)調(diào)對(duì)維持正常細(xì)胞穩(wěn)態(tài)和協(xié)調(diào)全身生理反應(yīng)至關(guān)重要的基因表達(dá)程序。

背景

信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子5 (STAT5) 包含兩種高度同源的異構(gòu)體 STAT5A 和 STAT5B，它們是細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子信號(hào)傳導(dǎo)的關(guān)鍵介質(zhì)。這些轉(zhuǎn)錄因子在配體與細(xì)胞因子受體結(jié)合后，由Janus激酶（JAK1、JAK2 和 JAK3）激活。多種配體（包括白細(xì)胞介素-2 (IL-2)、粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子 (GM-CSF)、生長(zhǎng)激素和催乳素）均可觸發(fā) STAT5 激活。受體刺激后，STAT5 蛋白發(fā)生酪氨酸磷酸化、二聚化（形成同源二聚體或異源二聚體），并轉(zhuǎn)位至細(xì)胞核，在那里調(diào)控靶基因的轉(zhuǎn)錄。STAT5 信號(hào)傳導(dǎo)是調(diào)控多種生物過(guò)程的基礎(chǔ)，包括細(xì)胞增殖、分化、存活以及造血和肝細(xì)胞代謝等組織特異性功能。 STAT5 的活性必須受到精確調(diào)控：過(guò)度活化會(huì)導(dǎo)致癌癥、骨髓增生性疾病、慢性炎癥和自身免疫性疾病等病理狀態(tài)，而活化不足則會(huì)導(dǎo)致貧血、血小板減少、侏儒癥、不育癥、免疫缺陷和代謝功能障礙。STAT5A 和 STAT5B 均存在多種較短的異構(gòu)體，這些異構(gòu)體通過(guò)選擇性剪接和翻譯后加工產(chǎn)生。這些蛋白質(zhì)進(jìn)一步受到磷酸化（絲氨酸、蘇氨酸或酪氨酸殘基）、泛素化和糖基化的調(diào)控，從而影響其穩(wěn)定性、二聚化能力和轉(zhuǎn)錄輸出。通過(guò)形成不同的二聚體復(fù)合物，STAT5 協(xié)調(diào)對(duì)維持正常細(xì)胞穩(wěn)態(tài)和協(xié)調(diào)全身生理反應(yīng)至關(guān)重要的基因表達(dá)程序。

參考文獻(xiàn)
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18508657/

PVDF膜孔徑規(guī)格選擇參照表

Protein Size (kDa)	PVDF Transfer Membrane Pore Size (μm)
< 10	0.22
10-20	0.22
20-30	0.45
30-45	0.45
45-70	0.45
80-100	0.45
100-140	0.45
> 140	0.45

技術(shù)支持

在訂購(gòu)、運(yùn)輸、儲(chǔ)存和使用我們的產(chǎn)品的任何階段，您遇到的任何問(wèn)題，均可以通過(guò)撥打我們的熱線電話400-668-6834，或者技術(shù)支持郵箱[email protected]，直接聯(lián)系到我們。我們會(huì)在24小時(shí)內(nèi)盡快聯(lián)系您。

* 必填項(xiàng)

Protein Size (kDa)	Separating Gel Percentage
4-40	20%
12-45	15%
10-70	12.5%
15-100	10%
25-100	8%
60-210	5%