TEAD4 Antibody [A12G4]

目錄號: F1553

抗體應(yīng)用：反應(yīng)性：Human

Lane 1: A549
Lane 2: A549 (TEAD4 CRISPR-Cas9 edited)
Lane 3: T-47D
Lane 4: Hela

規(guī)格	價格	庫存
20uL	790	現(xiàn)貨
50uL	1240	現(xiàn)貨
100uL	1990	現(xiàn)貨
100uL*2	3790	現(xiàn)貨
400-668-6834 [email protected]

操作要點

WB
建議曝光 60s 以上。

使用信息

稀釋比例
WB1:500

抗體應(yīng)用
WB

反應(yīng)性
Human

抗體類型
Mouse Monoclonal Antibody

儲存液配方
PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN?

儲存條件(自收到貨起)
-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

預(yù)測分子量實際分子量
48 kDa 50 kDa-75 kDa, 48 kDa
^*為什么預(yù)測分子量和實際分子量會有不同？以下原因可能會導(dǎo)致蛋白分子量與預(yù)測不同：翻譯后修飾（磷酸化/糖基化）；剪接變體和異構(gòu)體；相對電荷；多聚體。

陽性對照	HeLa; T-47D
陰性對照

樣品處理數(shù)據(jù)示例

樣品	處理情況
A549	Low expression
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^*該蛋白在不同的人源細胞、組織內(nèi)的表達量預(yù)測請參考：http://www.proteinatlas.org

樣品	處理情況

實驗方法

WB
實驗步驟：樣品制備 1. 組織樣品：破碎組織，加入適量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制劑Cocktail），低溫勻漿或置于冰上超聲裂解樣品，靜置30 min。 2. 貼壁細胞樣品：吸去培養(yǎng)基, 將細胞轉(zhuǎn)移至EP管中。用冰冷的 PBS 清洗細胞 2 遍。加入適量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制劑Cocktail），超聲破碎，冰上靜置裂解 30 min。冰上靜置裂解 5 min。 3. 懸浮細胞樣品：將培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至離心管中離心，棄上清，用冰冷的 PBS 清洗細胞 2 遍。加入適量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制劑Cocktail），冰上靜置裂解 5 min。 4. 將所得勻漿液/裂解液置于離心機中 4°C 離心 15 min，收集上清液； 5. 取少量裂解液測定蛋白質(zhì)濃度； 6. 加入蛋白上樣緩沖液，將 20 µL樣品在 95~100°C加熱 5 min，冰上靜置冷卻后離心 5 min。電泳分離 1. 根據(jù)所提蛋白的濃度，將適量蛋白樣品和 Marker 上樣至 SDS-PAGE 凝膠。建議分離膠（即下層膠）濃度：10 %。 SDS-PAGE 分離膠濃度選擇參照表 2. 電源調(diào) 80 V, 30 min。然后電源調(diào) 110 V~150 V，觀察 Marker，待蛋白所在的預(yù)染蛋白 Marker 指示帶得到合適的分離后，即可停止電泳。（注意電泳時電流切勿過大，如超過 150 mA 會導(dǎo)致溫度上升，容易影響跑膠結(jié)果。如無法避免采用大電流，可對電泳槽使用冰浴降溫。）轉(zhuǎn)膜 1.拿出電轉(zhuǎn)槽，把夾子和耗材浸泡在預(yù)冷電轉(zhuǎn)液中； 2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用轉(zhuǎn)移緩沖液沖洗； 3.按照“夾子黑邊-海綿-濾紙-濾紙-膠-PVDF膜-濾紙-濾紙-海綿-夾子白邊”的順序安裝好； 4.將蛋白電轉(zhuǎn)移至 PVDF膜上。（推薦采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔徑規(guī)格選擇參照表濕轉(zhuǎn)法參考條件：200 mA, 120 min。（注意電轉(zhuǎn)條件可根據(jù)蛋白大小適當調(diào)節(jié)，分子量大的蛋白適宜采用大電流，并延長轉(zhuǎn)膜時間，但需要確保電轉(zhuǎn)槽始終處于低溫的環(huán)境中，避免凝膠融化。）封閉 1. 電轉(zhuǎn)移后，室溫下用 TBST 洗膜 5 min； 2. 在封閉液中將膜孵育 1 h，室溫； 3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。抗體孵育 1. 用一抗稀釋液配制一抗工作液（建議一抗稀釋比 1:1000），4°C 條件下與膜輕柔搖晃孵育過夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min； 3. 在封閉液中加入二抗，室溫條件下與膜輕柔搖晃孵育 1 h； 4. 孵育結(jié)束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。顯色 1. 加入配制好的 ECL 發(fā)光底物（或根據(jù)二抗選擇其他顯色基質(zhì)）混合均勻； 2. 與膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜濕潤），置于顯影儀中進行曝光。(建議曝光時長 60s 以上)。

實驗步驟：

樣品制備

1. 組織樣品：破碎組織，加入適量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制劑Cocktail），低溫勻漿或置于冰上超聲裂解樣品，靜置30 min。

2. 貼壁細胞樣品：吸去培養(yǎng)基, 將細胞轉(zhuǎn)移至EP管中。用冰冷的 PBS 清洗細胞 2 遍。加入適量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制劑Cocktail），超聲破碎，冰上靜置裂解 30 min。冰上靜置裂解 5 min。

3. 懸浮細胞樣品：將培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至離心管中離心，棄上清，用冰冷的 PBS 清洗細胞 2 遍。加入適量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制劑Cocktail），冰上靜置裂解 5 min。

4. 將所得勻漿液/裂解液置于離心機中 4°C 離心 15 min，收集上清液；

5. 取少量裂解液測定蛋白質(zhì)濃度；

6. 加入蛋白上樣緩沖液，將 20 µL樣品在 95~100°C加熱 5 min，冰上靜置冷卻后離心 5 min。

電泳分離

1. 根據(jù)所提蛋白的濃度，將適量蛋白樣品和 Marker 上樣至 SDS-PAGE 凝膠。建議分離膠（即下層膠）濃度：10 %。 SDS-PAGE 分離膠濃度選擇參照表

2. 電源調(diào) 80 V, 30 min。然后電源調(diào) 110 V~150 V，觀察 Marker，待蛋白所在的預(yù)染蛋白 Marker 指示帶得到合適的分離后，即可停止電泳。（注意電泳時電流切勿過大，如超過 150 mA 會導(dǎo)致溫度上升，容易影響跑膠結(jié)果。如無法避免采用大電流，可對電泳槽使用冰浴降溫。）

轉(zhuǎn)膜

1.拿出電轉(zhuǎn)槽，把夾子和耗材浸泡在預(yù)冷電轉(zhuǎn)液中；

2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用轉(zhuǎn)移緩沖液沖洗；

3.按照“夾子黑邊-海綿-濾紙-濾紙-膠-PVDF膜-濾紙-濾紙-海綿-夾子白邊”的順序安裝好；

4.將蛋白電轉(zhuǎn)移至 PVDF膜上。（推薦采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔徑規(guī)格選擇參照表

濕轉(zhuǎn)法參考條件：200 mA, 120 min。

（注意電轉(zhuǎn)條件可根據(jù)蛋白大小適當調(diào)節(jié)，分子量大的蛋白適宜采用大電流，并延長轉(zhuǎn)膜時間，但需要確保電轉(zhuǎn)槽始終處于低溫的環(huán)境中，避免凝膠融化。）

封閉

1. 電轉(zhuǎn)移后，室溫下用 TBST 洗膜 5 min；

2. 在封閉液中將膜孵育 1 h，室溫；

3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

抗體孵育

1. 用一抗稀釋液配制一抗工作液（建議一抗稀釋比 1:1000），4°C 條件下與膜輕柔搖晃孵育過夜；

2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；

3. 在封閉液中加入二抗，室溫條件下與膜輕柔搖晃孵育 1 h；

4. 孵育結(jié)束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

顯色

1. 加入配制好的 ECL 發(fā)光底物（或根據(jù)二抗選擇其他顯色基質(zhì)）混合均勻；

2. 與膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜濕潤），置于顯影儀中進行曝光。(建議曝光時長 60s 以上)。

Datasheet & SDS

生物描述

特異性
TEAD4 Antibody [A12G4] 檢測內(nèi)源性 TEAD4 總的蛋白水平。

蛋白定位
細胞核

Uniprot ID
Q15561

克隆號
A12G4

別名
TEAD4,TEF-3

背景
TEA 域轉(zhuǎn)錄因子 4 (TEAD4) 是 YAP 轉(zhuǎn)錄復(fù)合物中的關(guān)鍵 DNA 結(jié)合蛋白，受 Hippo 信號通路調(diào)控。后生動物中這種高度保守的通路通過調(diào)控細胞增殖和凋亡來控制器官大小。TEAD4 可作為致癌基因、表觀遺傳調(diào)控因子和線粒體調(diào)控因子。其完全轉(zhuǎn)錄活性需要輔激活因子，例如 Yes 相關(guān)蛋白 (YAP) 或其同源物 TAZ（具有 PDZ 結(jié)合基序的轉(zhuǎn)錄輔激活因子），它們充當信號樞紐，將細胞外信號傳遞到基因轉(zhuǎn)錄。TEAD4 在決定胚泡分化方面起著關(guān)鍵作用，并通過促進轉(zhuǎn)移、癌癥干細胞和對治療的抵抗力來促進腫瘤發(fā)生。雖然它主要是一種核蛋白，但在某些條件下，如滲透應(yīng)激、細胞密度或精氨酸可用性，其定位會轉(zhuǎn)移到細胞質(zhì)中。TEAD4 分布在各種細胞中細胞核、細胞質(zhì)和線粒體等細胞區(qū)域，在這些區(qū)域，它參與了細胞核和線粒體環(huán)境中氧化磷酸化 (OXPHOS) 基因的轉(zhuǎn)錄激活。TEAD4 的過度表達已在多種癌癥中觀察到，包括結(jié)腸癌、胃癌、乳腺癌和前列腺癌，使其成為一種有價值的預(yù)后標志物。其致癌活性和其他功能受到其亞細胞定位的嚴格調(diào)控，強調(diào)了其在細胞和病理過程中的多方面作用。

背景

TEA 域轉(zhuǎn)錄因子 4 (TEAD4) 是 YAP 轉(zhuǎn)錄復(fù)合物中的關(guān)鍵 DNA 結(jié)合蛋白，受 Hippo 信號通路調(diào)控。后生動物中這種高度保守的通路通過調(diào)控細胞增殖和凋亡來控制器官大小。TEAD4 可作為致癌基因、表觀遺傳調(diào)控因子和線粒體調(diào)控因子。其完全轉(zhuǎn)錄活性需要輔激活因子，例如 Yes 相關(guān)蛋白 (YAP) 或其同源物 TAZ（具有 PDZ 結(jié)合基序的轉(zhuǎn)錄輔激活因子），它們充當信號樞紐，將細胞外信號傳遞到基因轉(zhuǎn)錄。TEAD4 在決定胚泡分化方面起著關(guān)鍵作用，并通過促進轉(zhuǎn)移、癌癥干細胞和對治療的抵抗力來促進腫瘤發(fā)生。雖然它主要是一種核蛋白，但在某些條件下，如滲透應(yīng)激、細胞密度或精氨酸可用性，其定位會轉(zhuǎn)移到細胞質(zhì)中。TEAD4 分布在各種細胞中細胞核、細胞質(zhì)和線粒體等細胞區(qū)域，在這些區(qū)域，它參與了細胞核和線粒體環(huán)境中氧化磷酸化 (OXPHOS) 基因的轉(zhuǎn)錄激活。TEAD4 的過度表達已在多種癌癥中觀察到，包括結(jié)腸癌、胃癌、乳腺癌和前列腺癌，使其成為一種有價值的預(yù)后標志物。其致癌活性和其他功能受到其亞細胞定位的嚴格調(diào)控，強調(diào)了其在細胞和病理過程中的多方面作用。

參考文獻
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/35602596/

PVDF膜孔徑規(guī)格選擇參照表

Protein Size (kDa)	PVDF Transfer Membrane Pore Size (μm)
< 10	0.22
10-20	0.22
20-30	0.45
30-45	0.45
45-70	0.45
80-100	0.45
100-140	0.45
> 140	0.45

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* 必填項

Protein Size (kDa)	Separating Gel Percentage
4-40	20%
12-45	15%
10-70	12.5%
15-100	10%
25-100	8%
60-210	5%