GW843682X

GW 843682X是一種能加入培養(yǎng)基中抑制大多數(shù)腫瘤細(xì)胞增殖的亞微摩爾級抑制劑，但是無法抑制前列腺癌細(xì)胞系PC-3的增殖。對比正常二倍體成纖維細(xì)胞(HDF)來說GW 843682X對腫瘤細(xì)胞具有選擇性抑制，這種抑制效果比正常二倍體成纖維細(xì)胞(HDF)強(qiáng)10倍多。GW 843682X(約200 nM)對MES-SA/DX5和親本系MES-SA效果一樣，說明該化合物沒有被細(xì)胞內(nèi)P-糖蛋白外排泵有效排出細(xì)胞。在表達(dá)tet誘導(dǎo)的p53-PLK1嵌合體的HeLa細(xì)胞中，GW843682X能劑量依賴的抑制PLK1磷酸化p53的第15位絲氨酸。GW 843682X在濃度3.3 μM時能提高HDF細(xì)胞副產(chǎn)物的30%，而GW 843682X能提高H460副產(chǎn)物最少要在濃度為0.37 μM。在HDF細(xì)胞中，3 μM濃度的GW 843682X能強(qiáng)有效的將細(xì)胞阻斷在G2-M期，而1 μM濃度的GW 843682X則阻斷細(xì)胞在G2-M期的能力微乎其微。而對H460細(xì)胞，GW 843682X (3 μM)阻斷細(xì)胞G2-M期的能力沒有對HDF細(xì)胞多，但是會增加亞2倍DNA含量。GW 843682X (0.5 μM)會導(dǎo)致H460細(xì)胞體積增大且產(chǎn)生多倍體核酸^[1]。GW 843682X能抑制 PLK1, PLK2, PLK3和PLK4 K_i值分別為4.8 nM, 3.8 nM, 8 nM和0.163 μM。^[2] GW 843682X (1 μM)會干涉HeLa細(xì)胞中中心紡錘體上內(nèi)源性MyoGEF的定位。GW 843682X (1 μM)會打亂HeLa細(xì)胞中GFP-MyoGEF-wt (GFP-WT), GFP-MyoGEF-T574A (GFP-T574A)和GFP-MyoGEF-T574E (GFP-T574E)在中心紡錘體上的定位。^[3] GW-843682X引起了同一早期中心體的組裝和蛋白質(zhì)的招募，這表示了藥物對Plk1的抑制作用是特異的。HeLa細(xì)胞中GW 843682X (200 nM)引起微管成束，中心粒和PRC1在赤道板聚集^[4]。

在96孔板中，將H460細(xì)胞按每孔密度2 × 10³接種，HDF細(xì)胞按每孔5 × 10³的密度接種，耐藥性細(xì)胞系MES-SA/DX5和其敏感的母細(xì)胞系MES-SA分別按7 × 10³和6 × 10³的密度接種。這個密度使得對照組在3天實(shí)驗(yàn)中處于對數(shù)生長期。用含有3倍稀釋的GW 843682X (30–0.00152 μM)的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞，低糖DMEM培養(yǎng)基中包含5% FBS, 50 μg/mL慶大霉素和0.3% (v/v) DMSO (HDF細(xì)胞); RPMI 1640培養(yǎng)基中包含5% FBS, 50 μg/mL 慶大霉素和0.3% (v/v) DMSO (H460); 或McCoy's 5A培養(yǎng)基中包含5%FBS, 50 μg/mL慶大霉素和0.3% (v/v) DMSO (MES-SA和MES-SA/DX5)。