PACAP 1-38

PACAP 1-38對(duì)交感神經(jīng)NPY和兒茶酚胺的產(chǎn)生具有有效的、持續(xù)的激活作用^[1]。它是一種多效的神經(jīng)肽段，具有多種生物活性，包括作為神經(jīng)遞質(zhì)、神經(jīng)調(diào)節(jié)物質(zhì)、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的活性，以及在免疫細(xì)胞中，通過(guò)對(duì)MAPK信號(hào)通路以及NFκB激活的調(diào)節(jié)來(lái)調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)。PACAP 1-38能夠顯著地防止由于一直促炎性因子的產(chǎn)生、抑制p38 MAPK及PAC1和VPAC1介導(dǎo)的NF-κB的易位而導(dǎo)致的腎臟近曲小管上皮細(xì)胞損傷。PACAP38直接抑制骨髓瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，可能是通過(guò)間接地抑制骨髓基質(zhì)細(xì)胞中生長(zhǎng)因子IL-6的產(chǎn)生，IL-6的產(chǎn)生可被骨髓瘤細(xì)胞的粘附激活。PACAP38可以劑量依賴方式抑制IL-6和TNFα的釋放^[2]。

將人類(lèi)腎近端小管細(xì)胞置于6孔組織培養(yǎng)皿中，加入含0.5%(v/v)FBS的DRM-23E培養(yǎng)基，置于37℃的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)。然后用無(wú)血清的培養(yǎng)基對(duì)細(xì)胞進(jìn)行洗滌，用κ-LC (1.5 mg/ml, ∼ 50 μM)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行處理，加入（或不加入）不同濃度的PACAP38以及激酶和轉(zhuǎn)錄因子抑制劑。利用臺(tái)盼藍(lán)拒染實(shí)驗(yàn)測(cè)定細(xì)胞活力、細(xì)胞生存能力。在所有的實(shí)驗(yàn)中，至少有85%的細(xì)胞是存活的。在暴露于所檢測(cè)的底物中后，收集培養(yǎng)基上清液并儲(chǔ)存于-70℃，用于后續(xù)細(xì)胞因子實(shí)驗(yàn)。在移除細(xì)胞培養(yǎng)基后，用預(yù)冷的PBS洗滌細(xì)胞，提取細(xì)胞蛋白質(zhì)。

PACAP38在體內(nèi)能夠有效地抑制輕鏈誘導(dǎo)的細(xì)胞因子的表達(dá)并阻止所造成的細(xì)胞損傷。對(duì)一些腫瘤來(lái)說(shuō)，PACAP38也被認(rèn)為是一種自動(dòng)調(diào)節(jié)因子，以自分泌形式激活腫瘤的生長(zhǎng)^[2]。