PF-5274857

目錄號：S2777 Purity: 99.86%

PF-5274857是一種有效的，選擇性Smoothened(Smo)拮抗劑，抑制Hedgehog (Hh)信號通路，IC50和K_i分別為5.8 nM和4.6 nM，可以穿透血腦屏障。

PF-5274857 Chemical Structure

CAS: 1373615-35-0

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生物活性

產(chǎn)品描述

PF-5274857是一種有效的，選擇性Smoothened(Smo)拮抗劑，抑制Hedgehog (Hh)信號通路，IC50和K_i分別為5.8 nM和4.6 nM，可以穿透血腦屏障。

特性

PF-5274857對于治療某些腫瘤具有非常好的潛在臨床應用價值，如腦瘤以及活化的Hh通路驅(qū)動的腦轉移瘤。

靶點

Smoothened ^[1]	Smoothened ^[1]
4.6 nM(Ki)	5.8 nM

體外研究(In Vitro)
體外研究活性	PF-5274857的K_i為4.6 nM. PF-5274857可以完全抑制 Shh誘導的Hh通路活性，通過在MEF細胞中測量Smo下游基因 Gli1 的轉錄活性可知IC50為2.7nM。PF-5274857可以結合 Smo，IC50 為 5.8 nM. PF-5274857對μ-阿片受體可以微弱抑制，在隨后的一項功能分析中測得解離常數(shù)為36μM ^[1]
激酶實驗	生化分析
激酶實驗	過表達人源Smo (氨基酸181-787)的HEK293細胞培養(yǎng)在含有10% FBS, Pen–Strep以及 0.1 mg/mL 潮霉素的DMEM培養(yǎng)基中，直到90%密度。用冷的PBS洗過之后, 將細胞用膜制備緩沖液重懸均勻，緩沖液成分包含50 mM Tris-HCl, pH 7.5, 250 mM 蔗糖含有Roche完全蛋白酶雞尾酒。將上述勻漿離心并用分析緩沖液重懸細胞，分析緩沖液包含50 mM Tris-HCl, pH 7.5, 100 mM NaCl, 25 mM MgCl₂, 1 mM EDTA, 和0.1%無蛋白酶BSA,然后在玻璃組織研磨機中使之均勻。含有Smo的總蛋白利用Pierce BCA蛋白分析法來測定。對于競爭性結合實驗分析，加入100 μL 分析緩沖液到96孔GF/B 濾板，進行10分鐘的濾板預濕潤然后去掉。然后加入20 μL 分析緩沖液, 10μL藥物的連續(xù)稀釋液, 20 μL ³H-Smo 拮抗劑 (終濃度3 nM)和50 μL 膜制備品(含有40 μg 總蛋白)。濾板在室溫孵育2小時，洗過之后真空晾干。然后濾板在60°C 烘箱中干燥1小時，加入 45 μL Microscint 20，室溫孵育30 分鐘到1小時, 然后用TopCount閃爍記數(shù)器計數(shù)。數(shù)據(jù)用GraphPad Prism軟件進行分析。
細胞實驗	細胞系	Gli-Luc/MEF 細胞
	濃度	50 pM- 3 μM
	孵育時間	48 小時
	方法	Gli-Luc/MEF細胞培養(yǎng)在含有10%熱失活FBS, 2mM l-glutamine和0.55 mM β-mercaptoethanol 的DMEM培養(yǎng)基中直到90%細胞密度。第一天, 胰酶消化后的細胞按每孔7,500個接種在白色384孔板中，每孔加入20 μL含有1% 熱失活FBS和1 mM 丙酮酸鈉的OptiMEM 培養(yǎng)基。平板在37°C和5% CO₂環(huán)境中培養(yǎng)過夜。第2天, 加入3 μM到50pM的PF-5274857 ，按照3倍連續(xù)稀釋，然后加入重組鼠源Sonic Hedgehog，終濃度2μg/mL。在37°C，5% CO₂條件下細胞與PF-5274857和Shh孵育48小時。第四天利用Bright-Glo 熒光素酶分析系統(tǒng)進行熒光素酶分析。簡言之, 每孔培養(yǎng)基中加入25 μL Bright-Glo熒光素酶試劑。室溫孵育5分鐘然后酶標儀檢測數(shù)據(jù)然后計算PF-5274857的IC50值。

體內(nèi)研究(In Vivo)
體內(nèi)研究活性	PF-5274857具有明顯的腫瘤生長抑制作用，這用抑制具有劑量依賴特性并能在高劑量(≥10 mg/kg)治療6天后誘導腫瘤退化。在腫瘤組織中PF-5274857不同程度地下調(diào)Gli1, Gli2, Ptch1和 Ptch2基因的表達水平，用藥后6到12小時達到最好效果，然而PF-5274857 對Smo表達水平?jīng)]有影響。在皮膚組織中，PF-5274857在相似的時間進程中下調(diào)Gli1和Gli2表達。在Ptch^+/?p53^+/?髓母細胞瘤同種異體移植小鼠模型中得到的PF-5274857對腫瘤Gli1 mRNA生產(chǎn)率抑制的IC50為 8.9 nM ，相當于血漿中藥物在這一濃度下處理6天后腫瘤生長抑制達到119%。在Ptch^+/?p53^?/? 髓母細胞瘤同種異體移植小鼠模型中IC50值預計為 3.5 nM, 與Ptch^+/?p53^+/?模型結果一致^[1] 。
動物實驗	Animal Models	攜帶原發(fā)性Ptch^+/?p53^+/?或Ptch^+/?p53^?/?髓母細胞瘤腫瘤的 SCID-beige 小鼠
	Dosages	0 mg/kg, 1 mg/kg, 5 mg/kg, 10 mg/kg和30 mg/kg
	Administration	口服

參考文獻
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22084163/

參考文獻

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22084163/

化學信息&溶解度

分子量	436.96	分子式	C₂₀H₂₅ClN₄O₃S
CAS號	1373615-35-0	SDF	Download PF-5274857 SDF
Smiles	CC1=CC(=C(N=C1)C2=CC(=NC=C2Cl)N3CCN(CC3)C(=O)CCS(=O)(=O)C)C
儲存條件(自收到貨起)	3年-20°C粉狀	儲備液保存和期限建議分裝儲備液，避免反復凍融！	1年-80°C溶于溶劑
儲存條件(自收到貨起)	3年-20°C粉狀	儲備液保存和期限建議分裝儲備液，避免反復凍融！	1個月-20°C溶于溶劑

體外溶解度
批次：

DMSO : 93 mg/mL ( (212.83 mM) ；DMSO吸濕會降低化合物溶解度，請使用新開封DMSO)

Water : 93 mg/mL (212.83 mM)

Ethanol : Insoluble

DMSO : 87 mg/mL ( (199.1 mM) ；DMSO吸濕會降低化合物溶解度，請使用新開封DMSO)

Water : Insoluble

Ethanol : Insoluble

摩爾濃度計算器

體內(nèi)溶解配方批次：現(xiàn)配現(xiàn)用，請按從左到右的順序依次添加，澄清后再加入下一溶劑				動物體內(nèi)配方計算器
均勻懸濁液	CMC-NA	≥5mg/ml	以 1 mL 工作液為例，取 5 mg該產(chǎn)品加到 1 ml CMC-NA 溶液中，混合均勻，即可得工作液濃度為 5 mg/ml的均勻懸濁液。
澄清溶液	Saline 該配方已經(jīng)過Selleck實驗室實測。如果上述溶解方案不能滿足您的需求，可聯(lián)系Selleck銷售提供定制化測試。	30.000mg/ml (68.66mM)	以 1 mL 工作液為例，取30mg該產(chǎn)品加到1ml生理鹽水（0.9% NaCL溶液）中，混合均勻使其澄清，請現(xiàn)配現(xiàn)用！
均勻懸濁液	CMC-NA	≥5mg/ml	以 1 mL 工作液為例，取 5 mg該產(chǎn)品加到 1 ml CMC-NA 溶液中，混合均勻，即可得工作液濃度為 5 mg/ml的均勻懸濁液。

實驗計算

摩爾濃度計算器

質(zhì)量	濃度	體積	分子量
=	×	×

稀釋計算器分子量計算器

動物體內(nèi)配方計算器（澄清溶液）

第一步：請輸入基本實驗信息（考慮到實驗過程中的損耗，建議多配一只動物的藥量）

給藥劑量 mg/kg 動物平均體重 g 每只動物給藥體積 μL 動物數(shù)量只

第二步：請輸入動物體內(nèi)配方組成（配方適用于不溶于水的藥物；不同批次藥物配方比例不同，請聯(lián)系Selleck為您提供正確的澄清溶液配方）

% DMSO + % + % Tween 80 + % ddH2O

%DMSO+ %

計算結果：

工作液濃度： mg/ml；

DMSO母液配制方法： mg 藥物溶于μL DMSO溶液（母液濃度mg/mL，注：如該濃度超過該批次藥物DMSO溶解度，請先聯(lián)系Selleck）；

體內(nèi)配方配制方法：取μL DMSO母液，加入μL PEG300，混勻澄清后加入μL Tween 80，混勻澄清后加入μL ddH₂O，混勻澄清。

體內(nèi)配方配制方法：取μL DMSO母液，加入μL Corn oil，混勻澄清。

注意：1. 首先保證母液是澄清的；
2.一定要按照順序依次將溶劑加入，進行下一步操作之前必須保證上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用渦旋、超聲或水浴加熱等物理方法助溶。

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