AG-14361

AG14361比Benzamides至少有效1×10³倍。AG14361作用于透性化SW620細(xì)胞和完整SW620細(xì)胞時，IC50分別為29 nM 和14 nM。AG14361結(jié)合到雞PARP-1的催化結(jié)構(gòu)域的晶體分析顯示AG14361三環(huán)環(huán)系統(tǒng)位于氨基酸殘基Trp861，His862，Gly863，Tyr896，Phe897，Ala898，Lys903，Ser904，Tyr907和Glu988組成的“口袋”中。AG14361與 Ser904和Gly863形成重要氫鍵，與Glu988形成水介導(dǎo)的氫鍵。AG14361誘導(dǎo)的生長受抑制不是因為與PARP-1相關(guān)的效果，因為在比GI50濃度低很多時(≤1 μM)，也可觀察到PARP-1最大抑制效果。0.4 μM AG14361不影響癌細(xì)胞基因表達或生長，但是提高抗增殖活性,且作用于LoVo細(xì)胞，抑制從潛在的致命γ輻射損傷中恢復(fù)，抑制達73％。此外, 0.4 μM AG14361不會大幅改變基因表達。0.4 μM AG14361處理A549細(xì)胞17小時后，不會改變6800 種基因表達。因此,雖然0.4 μM AG14361 抑制85%以上細(xì)胞PARP-1 活性，但是AG14361 不改變基因表達和細(xì)胞增殖，說明低濃度AG14361的細(xì)胞作用效果是特異性抑制 PARP-1。處于更高的抑制生長的濃度時, AG14361 影響基因表達，但是這種影響與PARP-1受抑制無關(guān)，因為在PARP^-/-和PARP-1^+/+細(xì)胞中，細(xì)胞增殖一樣受影響。AG14361快速吸收進血流中，分布到腫瘤和肝臟中，在大腦中檢測到低濃度。組織-血藥濃度比顯示，AG14361保留在腫瘤組織中，隨著時間的推移，在兩種移植瘤模型中，在體外抑制PARP-1活性所需的腫瘤濃度過剩（2小時≥15μM）。AG14361 增強活性，作用于全部 MMR熟練細(xì)胞(1.5-3.3倍)的活性，但是更有效作用于MMR缺陷細(xì)胞(增強3.7-5.2倍),克服阻力。相反, Benzylguanine 只提高作用于MMR熟練細(xì)胞的效果，而作用于MMR缺陷細(xì)胞則無效果。^[2] AG14361 增強拓?fù)洚悩?gòu)酶 I毒藥的抑制生長作用和毒性效果。AG14361提高Camptothecin誘導(dǎo)DNA單鏈斷裂的持久性。^[3]

LoVo和SW620結(jié)腸直腸細(xì)胞和A549非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞培養(yǎng)在含 10% 胎牛血清（FCS）的RPMI-1640培養(yǎng)基上。測定在 96孔板中呈指數(shù)生長的LoVo, A549, 和SW620 細(xì)胞生長受抑制情況。使用AG14361(0–20 μM)單獨處理細(xì)胞，或者聯(lián)用處理細(xì)胞。培養(yǎng)5天后，使用10% 三氯乙酸混合細(xì)胞，然后使用sulforhodamine B對細(xì)胞進行染色。通過計算機生成曲線計算 AG14361單獨給藥或聯(lián)合給藥，抑制50% 生長(GI50)時的濃度

AG14361處理攜帶LoVo移植瘤的小鼠，然后進行統(tǒng)計學(xué)輻射，顯著提高對放射療法的敏感性。AG14361作用于移植瘤，統(tǒng)計學(xué)上顯著提高血流，因此，可能促進藥物輸送到移植瘤。在體內(nèi), AG14361按無毒劑量處理，提高 x射線照射誘導(dǎo)的 LoVo 移植瘤生長延遲，提高2到3倍。藥效學(xué)實驗檢測， AG14361按10 mg/kg劑量腹腔注射處理SW620移植瘤至少4小時，75%以上 PARP-1活性受抑制。^[1]