NVP-BSK805 2HCl

別名: BSK805

目錄號(hào)：S2686 Purity: 99.95%

NVP-BSK805 2HCl是一種有效的，選擇性的，ATP競(jìng)爭(zhēng)性的JAK2抑制劑，IC50為0.5 nM，比作用于JAK1， JAK3和TYK2選擇性高20倍以上。

NVP-BSK805 2HCl Chemical Structure

CAS: 1942919-79-0

規(guī)格	價(jià)格	庫(kù)存
10mM (1mL in DMSO)	2790	現(xiàn)貨
5mg	2214.99	現(xiàn)貨
50mg	7961.31	現(xiàn)貨
1g	31900	現(xiàn)貨
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400-668-6834 [email protected]

產(chǎn)品質(zhì)控

批次：純度： 99.95%

99.95

NVP-BSK805 2HCl相關(guān)產(chǎn)品

相關(guān)靶點(diǎn)	JAK1 JAK2 JAK3 Tyk2	點(diǎn)擊展開(kāi)
相關(guān)產(chǎn)品	AZD1480 WP1066 Momelotinib (CYT387) Filgotinib (GLPG0634) AT9283 Gandotinib (LY2784544) TG101209 Cerdulatinib (PRT062070) hydrochloride Pacritinib WHI-P154 FLLL32 CEP-33779 Decernotinib (VX-509) AZ 960 ZM 39923 HCl Cerdulatinib (PRT062070) BMS-911543 XL019 Curcumol Solcitinib Oclacitinib?maleate Pyridone 6 Creatine Ritlecitinib (PF-06651600) Itacitinib (INCB39110) Deucravacitinib (BMS-986165) Peficitinib FM-381 WHI-P97 1,2,3,4,5,6-Hexabromocyclohexane JANEX-1 Brepocitinib (PF-06700841) Selective JAK3 inhibitor 1 SAR-20347 BD750 Brevilin A	點(diǎn)擊展開(kāi)
相關(guān)化合物庫(kù)	激酶抑制劑庫(kù) FDA藥物庫(kù) 天然產(chǎn)物庫(kù) 酪氨酸激酶抑制劑分子庫(kù) JAK-STAT信號(hào)通路庫(kù)	點(diǎn)擊展開(kāi)

生物活性

產(chǎn)品描述

NVP-BSK805 2HCl是一種有效的，選擇性的，ATP競(jìng)爭(zhēng)性的JAK2抑制劑，IC50為0.5 nM，比作用于JAK1， JAK3和TYK2選擇性高20倍以上。

靶點(diǎn)

JAK2 ^[1] (Cell-free assay)	TYK2 ^[1] (Cell-free assay)	JAK3 ^[1] (Cell-free assay)	JAK1 ^[1] (Cell-free assay)
~0.5 nM	10.76 nM	18.68 nM	31.63 nM

體外研究(In Vitro)
體外研究活性	NVP-BSK805是JAK2強(qiáng)有效的抑制劑，且對(duì)JAK2的特異性很好，其對(duì)JAK2的抑制效果比對(duì)JAK1, JAK3和TYK2要強(qiáng)20倍。0.5 nM 的NVP-BSK805對(duì)全長(zhǎng)JAK2^V617F和野生型JAK2酶產(chǎn)生一半的最大抑制效果。NVP-BSK805阻斷JAK2^V617F細(xì)胞(Ba/F3)的生長(zhǎng)，且誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，其GI50在＜100 nM的濃度。STAT5磷酸化作用是依賴JAK2的基本的磷酸化作用，在JAK2 ^V617F突變的細(xì)胞中，大于等于100 nM的 NVP-BSK805像MB-02一樣能顯著抑制STAT5的磷酸化作用。分別用150 nM和1μM的NVP-BSK805孵育SET-2細(xì)胞，分別能抑制75%和95%的細(xì)胞生長(zhǎng)，且在這兩個(gè)濃度下培養(yǎng)24, 48和72小時(shí)，發(fā)現(xiàn)會(huì)引起濃度和時(shí)間依賴的細(xì)胞凋亡。可以檢測(cè)裂開(kāi)的PARP、Bcl-xL表達(dá)的減少和急劇增加的DNA含量少于2N的細(xì)胞數(shù)量，通過(guò)檢測(cè)這些確定結(jié)果。^[1] NVP-BSK805引起的細(xì)胞凋亡是需要通過(guò)激活凋亡蛋白級(jí)聯(lián)反應(yīng)來(lái)實(shí)現(xiàn)的，而當(dāng)在SET-2和MB-02細(xì)胞中抑制細(xì)胞凋亡蛋白酶caspase則可以抑制這種NVP-BSK805引起的細(xì)胞凋亡。在JAK2^V617F細(xì)胞, SET-2和MB-02細(xì)胞中，NVP-BSK805能調(diào)節(jié)Bim的翻譯后修飾和Mcl-1的水平。^[2]
激酶實(shí)驗(yàn)	酶活性分析
激酶實(shí)驗(yàn)	構(gòu)建含有人的JAK2激酶結(jié)構(gòu)域（840-1132位氨基酸）的質(zhì)粒pAcG2TtevJAK2。分別設(shè)計(jì)構(gòu)建了JAK3 (813-1124), TYK2 (888-1187)和JAK1(866-1154)的質(zhì)粒。通過(guò)產(chǎn)品手冊(cè)(BD Biosciences Pharmingen)構(gòu)建含有BD BaculoGold^TM Bright線性DNA的融合桿狀病毒，空斑實(shí)驗(yàn)以及單一斑塊病毒擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)。用100 mL加了青霉素/鏈霉素(Sigma)的 ExCell420培養(yǎng)基(JRH Biosciences Ltd)在27 ℃培養(yǎng)Sf9細(xì)胞48小時(shí)，用于表達(dá)Janus激酶結(jié)構(gòu)域。在懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞濃度在1 × 10⁶時(shí)進(jìn)行感染，用感染病毒后可溶性蛋白的產(chǎn)量?jī)?yōu)化每個(gè)病毒的感染復(fù)數(shù)(MOI)。分別在MOI為1和0.5的時(shí)候表達(dá)人的JAK2的激酶結(jié)構(gòu)域和JAK1, JAK3和TYK2的激酶結(jié)構(gòu)域。27 ℃下培養(yǎng)48小時(shí)表達(dá)JAK2，而JAK1, JAK3和TYK2則需48或72小時(shí)表達(dá)。感染后48小時(shí)或72小時(shí)后，將100 mL表達(dá)培養(yǎng)基用3000 ×g離心5分鐘收集細(xì)胞，用12 mL裂解緩沖液裂解細(xì)胞，緩沖液成分為50 mM Tris-HCl, pH 7.5, 150 mM NaCl, 2 mM EDTA, 1 mM DTT, 1 mM原釩酸鈉, 1 % Triton X-100, 10 % 甘油, 1× 不含EDTA的完全蛋白酶抑制劑混合物(Roche Diagnostics)和12.5 U/mL Benzonase。4℃孵育30分鐘，14,000 × g離心45分鐘分離顆粒性不可溶物質(zhì)。然后在4 ℃下用GST標(biāo)簽親和純化蛋白激酶結(jié)構(gòu)域。將之前離心所得的上清與0.2 mL含有50 %的谷胱甘肽瓊脂糖凝膠4B的懸浮液在4 ℃下孵育2小時(shí)，然后用1 mL含有50 mM Tris-HCl, pH 7.5, 150 mM NaCl, 0.1 % Triton X-100, 1 mM DTT和10 %甘油的緩沖液洗5次。用0.25 mL的洗脫緩沖液(50 mM Tris-HCl, pH 7.5, 150 mM NaCl, 0.1 % Triton X-100, 1mM DTT, 10 % 甘油, 10 mM還原性L-谷胱甘肽)洗脫結(jié)合到膠上的蛋白，分5次洗脫，每次孵育10分鐘。用Amicon Ultra-4離心超濾管濃縮洗脫液到五分之一的體積。加入終濃度0.1 %的Brij35后，將蛋白分成小份，置于-80℃速凍保存，在這種儲(chǔ)存條件下其激酶活性能保持至少6個(gè)月。在含有0.1 μM [γ³³P]-ATP, 1 mM MnCl₂, 5 mM MgCl₂, 30 μM合成的多肽底物EQEDEPEGDYFEWLE, 1 mM DTT, 1 % DMSO, 50 μg/mL BSA, 0.01 % Brij35和50 mM Tris-HCl pH 7.5的緩沖體系中加入JAK激酶結(jié)構(gòu)域作為酶，室溫孵育30分鐘。對(duì)于所有的蛋白ATP的濃度都低于其Km值。用XLfit? (型號(hào)205)的邏輯斯諦方程和全局?jǐn)M合功能對(duì)曲線進(jìn)行非線性回歸擬合。像激酶實(shí)驗(yàn)的條件一樣全長(zhǎng)野生型JAK2及其突變體V617F的表達(dá)及鑒定，實(shí)驗(yàn)方法在其他地方已經(jīng)介紹了。用內(nèi)源激酶通路分析NVP-BSK805的激酶選擇性實(shí)驗(yàn)，在Caliper實(shí)驗(yàn)中，在電場(chǎng)中當(dāng)多肽底物被磷酸化后會(huì)有不同的遷移速度，以此來(lái)檢測(cè)激酶實(shí)驗(yàn)。多肽帶有熒光標(biāo)簽，可以在毛細(xì)管系統(tǒng)中用于檢測(cè)、離子交換及定量。用LC3000儀器(Caliper Life Sciences, Hopkinton, MA, USA)對(duì)多肽的熒光進(jìn)行定量。激酶實(shí)驗(yàn)中激酶的活性可以通過(guò)檢測(cè)剩余的ATP的數(shù)量來(lái)定量。LanthaScreen^TM TR-FRET激酶實(shí)驗(yàn)中，鋱?jiān)禺?dāng)做鑭系元素螯合物融合了抗磷酸化底物的抗體。
細(xì)胞實(shí)驗(yàn)	細(xì)胞系	Ba/F3細(xì)胞
	濃度	100 nM
	孵育時(shí)間	72小時(shí)
	方法	可以通過(guò)比色分析試劑盒WST-1 (Roche Diagnostics GmbH)來(lái)檢測(cè)細(xì)胞存活率，用于分析對(duì)比用8點(diǎn)濃度范圍的藥物培養(yǎng)72小時(shí)后細(xì)胞的存活情況以及用DMSO處理細(xì)胞后產(chǎn)生相關(guān)的細(xì)胞增殖變化情況，這樣可以檢測(cè)JAK2抑制劑抑制細(xì)胞增殖的能力。重復(fù)三次后，計(jì)算平均值，XLfit 4 軟件繪圖，可以得到抑制最大生長(zhǎng)一半(GI50)的數(shù)值。
實(shí)驗(yàn)圖片	檢測(cè)方法	檢測(cè)指標(biāo)	實(shí)驗(yàn)圖片	PMID
實(shí)驗(yàn)圖片	Western blot	p-JAK2 / JAK2 p-STAT5 / STAT5 / PARP / Cleaved Caspase-3 / Cleaved caspase-7 / Cleaved Caspase-8 / Cleaved Caspase-9 / Bim / Mcl-1		22684457

體內(nèi)研究(In Vivo)
體內(nèi)研究活性	口服NVP-BSK805生物藥的利用效率在小鼠體內(nèi)的實(shí)驗(yàn)估計(jì)為45%，在大鼠實(shí)驗(yàn)中估計(jì)為50%。給攜帶Ba/F3 JAK2^V617F細(xì)胞的小鼠模型口服150 mg/kg的NVP-BSK805能抑制STAT5的磷酸化，脾腫大及白血病細(xì)胞的擴(kuò)散。給BALB/c小鼠口服25, 50和100 mg/kg劑量的NVP-BSK805，能抑制rhEpo誘導(dǎo)的STAT5磷酸化反應(yīng)和rhEpo調(diào)節(jié)的紅細(xì)胞增多和脾腫大。^[1]
動(dòng)物實(shí)驗(yàn)	Animal Models	RhEpo誘導(dǎo)的紅血球增多癥的雌性BALB/c小鼠
	Dosages	50, 75和100 mg/kg
	Administration	每天口服一次

參考文獻(xiàn)
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20587663/ https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21247487/

參考文獻(xiàn)

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20587663/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21247487/

化學(xué)信息&溶解度

分子量	563.47	分子式	C₂₇H₂₈F₂N₆O.2HCl
CAS號(hào)	1942919-79-0	SDF	Download NVP-BSK805 2HCl SDF
Smiles	C1CNCCC1N2C=C(C=N2)C3=NC4=C(C=CC=C4N=C3)C5=CC(=C(C(=C5)F)CN6CCOCC6)F.Cl.Cl
儲(chǔ)存條件(自收到貨起)	3年-20°C粉狀	儲(chǔ)備液保存和期限建議分裝儲(chǔ)備液，避免反復(fù)凍融！	1年-80°C溶于溶劑
儲(chǔ)存條件(自收到貨起)	3年-20°C粉狀	儲(chǔ)備液保存和期限建議分裝儲(chǔ)備液，避免反復(fù)凍融！	1個(gè)月-20°C溶于溶劑

體外溶解度
批次：

DMSO : 100 mg/mL ( (177.47 mM) ；DMSO吸濕會(huì)降低化合物溶解度，請(qǐng)使用新開(kāi)封DMSO)

Water : 100 mg/mL (177.47 mM)

Ethanol : 6 mg/mL (10.64 mM)

DMSO : 113 mg/mL ( (200.54 mM) ；DMSO吸濕會(huì)降低化合物溶解度，請(qǐng)使用新開(kāi)封DMSO)

Ethanol : 15 mg/mL (26.62 mM)

Water : 3 mg/mL (5.32 mM)

摩爾濃度計(jì)算器

體內(nèi)溶解配方批次：現(xiàn)配現(xiàn)用，請(qǐng)按從左到右的順序依次添加，澄清后再加入下一溶劑				動(dòng)物體內(nèi)配方計(jì)算器
均勻懸濁液	CMC-NA	≥5mg/ml	以 1 mL 工作液為例，取 5 mg該產(chǎn)品加到 1 ml CMC-NA 溶液中，混合均勻，即可得工作液濃度為 5 mg/ml的均勻懸濁液。
澄清溶液	30%PEG400 1 0.5%Tween80 2 5%propylene glycol 該配方已經(jīng)過(guò)Selleck實(shí)驗(yàn)室實(shí)測(cè)。如果上述溶解方案不能滿足您的需求，可聯(lián)系Selleck銷售提供定制化測(cè)試。	30.000mg/ml (53.24mM)	以 1 mL 工作液為例，取300μL100mg/ml的澄清PEG400儲(chǔ)備液加到5μLTween80中，混合均勻使其澄清；向上述體系中加入50μL Propylene glycol，混合均勻使其澄清；然后繼續(xù)加入645μL ddH2O定容至 1 mL。工作液請(qǐng)現(xiàn)配現(xiàn)用！
均勻懸濁液	CMC-NA	≥5mg/ml	以 1 mL 工作液為例，取 5 mg該產(chǎn)品加到 1 ml CMC-NA 溶液中，混合均勻，即可得工作液濃度為 5 mg/ml的均勻懸濁液。

實(shí)驗(yàn)計(jì)算

摩爾濃度計(jì)算器

質(zhì)量	濃度	體積	分子量
=	×	×

稀釋計(jì)算器分子量計(jì)算器

動(dòng)物體內(nèi)配方計(jì)算器（澄清溶液）

第一步：請(qǐng)輸入基本實(shí)驗(yàn)信息（考慮到實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的損耗，建議多配一只動(dòng)物的藥量）

給藥劑量 mg/kg 動(dòng)物平均體重 g 每只動(dòng)物給藥體積 μL 動(dòng)物數(shù)量只

第二步：請(qǐng)輸入動(dòng)物體內(nèi)配方組成（配方適用于不溶于水的藥物；不同批次藥物配方比例不同，請(qǐng)聯(lián)系Selleck為您提供正確的澄清溶液配方）

% DMSO + % + % Tween 80 + % ddH2O

%DMSO+ %

計(jì)算結(jié)果：

工作液濃度： mg/ml；

DMSO母液配制方法： mg 藥物溶于μL DMSO溶液（母液濃度mg/mL，注：如該濃度超過(guò)該批次藥物DMSO溶解度，請(qǐng)先聯(lián)系Selleck）；

體內(nèi)配方配制方法：取μL DMSO母液，加入μL PEG300，混勻澄清后加入μL Tween 80，混勻澄清后加入μL ddH₂O，混勻澄清。

體內(nèi)配方配制方法：取μL DMSO母液，加入μL Corn oil，混勻澄清。

注意：1. 首先保證母液是澄清的；
2.一定要按照順序依次將溶劑加入，進(jìn)行下一步操作之前必須保證上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用渦旋、超聲或水浴加熱等物理方法助溶。

技術(shù)支持

在訂購(gòu)、運(yùn)輸、儲(chǔ)存和使用我們的產(chǎn)品的任何階段，您遇到的任何問(wèn)題，均可以通過(guò)撥打我們的熱線電話400-668-6834，或者技術(shù)支持郵箱[email protected]，直接聯(lián)系到我們。我們會(huì)在24小時(shí)內(nèi)盡快聯(lián)系您。

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C1=C0/X	C1:	LOG(C1):
C2=C1/X	C2:	LOG(C2):
C3=C2/X	C3:	LOG(C3):
C4=C3/X	C4:	LOG(C4):
C5=C4/X	C5:	LOG(C5):
C6=C5/X	C6:	LOG(C6):
C7=C6/X	C7:	LOG(C7):
C8=C7/X	C8:	LOG(C8):